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蛋白免疫印跡技術(shù)2015/5/21

免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質(zhì)印跡（westernblot），它是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。westernblot是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上...

核酸凝膠電泳觀察法2015/5/19

實驗原理：瓊脂糖是海藻中提取的線狀高聚物，不同濃度的瓊脂糖密度不同，一般PCR產(chǎn)物使用2%濃度，0.5Kb-10Kb的DNA使用1%濃度，基因組DNA使用0.3%-0.7%濃度；不同大小的核酸在同一濃...

離子交換柱純化蛋白的問題2015/5/13

采用離子交換柱純化蛋白時，洗脫采用的離子強度的大小范圍應該如何確定，可以根據(jù)什么來調(diào)整洗脫時的離子強度？離子交換純化是利用離子交換劑上的可解離基團（活性基團）對各種離子的親和力不一樣人達到分離的目的的...

超濾實驗基本步驟2015/4/24

1.配料；2.檢查出口閥門是否關(guān)閉，攪拌料漿；3.啟動泵，打開出口閥，開始超濾；4.改變壓力，觀察不同壓力對超濾的影響；5.配制不同濃度的懸浮液進行超濾，觀察懸浮液濃度對超濾的影響；6.關(guān)閉泵，結(jié)束實...

蛋白純化經(jīng)驗指南2015/4/14

1）我現(xiàn)在手頭有個融合蛋白，純化的時候用助溶劑溶解后做了GST親和層析，之后用蛋白酶切割后卻發(fā)現(xiàn)目的蛋白沒有活性。請問有哪些可能會出現(xiàn)這種原因？怎么解決？測過基因序列，沒有問題。細胞破碎后，融合蛋白在...

Adeno-X 表達系統(tǒng)----Z有效的腺病毒系統(tǒng)之一2015/4/1

在人細胞中快速、高水平地表達目的蛋白在2至3個星期內(nèi)即可獲得價的病毒無需噬斑純化靶細胞可以是分裂或不分裂的細胞（dividing/ornondividingcell）CLONTECH的Adeno-X?...

原核表達操作步驟及注意事項2015/3/27

克隆化基因插入合適載體后導入大腸桿菌用于表達大量蛋白質(zhì)的方法一般稱為原核表達。這種方法在蛋白純化、定位及功能分析等方面都有應用。大腸桿菌用于表達重組蛋白有以下特點：易于生長和控制；用于細菌培養(yǎng)的材料不...

重組蛋白純化的基本策略2015/3/25

三階段純化策略純化問題所涉及的具體步驟zui終取決于樣品的性質(zhì)。但也有共同可參考的階段捕獲階段：目標是澄清、濃縮和穩(wěn)定目標蛋白。中度純化階段：目標是除去大多數(shù)大量雜質(zhì)，如其它蛋白、核酸、內(nèi)毒素和病毒等...

Pichia酵母表達系統(tǒng)使用心得2015/3/12

甲醇酵母表達系統(tǒng)有不少優(yōu)點，其中以Invitrogen公司的Pichia酵母表達系統(tǒng)zui為人熟知，并廣泛應用于外源蛋白的表達。雖然說酵母表達操作簡單表達量高，但是在實際操作中，并不是每個外源基因都能...

現(xiàn)代生物分離技術(shù)在多肽蛋白質(zhì)分離純化中的應用2015/3/10

一、前言隨著基因工程和細胞工程的發(fā)展，盡管傳統(tǒng)的分離方法（如溶劑萃取技術(shù)）已在抗生素等物質(zhì)的生產(chǎn)中廣泛應用，并顯示出優(yōu)良的分離性能，但它難以提取和分離蛋白質(zhì)。其主要原因有兩個：被分離對象——蛋白質(zhì)等在...

動物淋巴管內(nèi)皮細胞的分離2015/1/27

實驗材料：1.哺乳動物胸導管淋巴管2.1×PBS，含青霉素100u/ml和鏈霉素100μg/ml，pH7.43.0.2%Ⅰ型膠原酶4.眼科剪，眼科鑷5.慕絲線（7號線）、細鐵絲6.離心管（15ml、5...

支原體污染以及檢測2015/1/21

支原體是一種大小介于細菌和病毒之間(zui小直徑0.2um)并獨立生活的微生物，約有1%可通過濾菌器。支原體無細胞壁形態(tài)呈高度多形性，可為圓形、絲狀或梨形。支原體形態(tài)多變，在光境下不易看清內(nèi)部結(jié)構(gòu)。電...

培養(yǎng)物的污染及防止2015/1/19

按現(xiàn)代的觀念，凡是混入培養(yǎng)環(huán)境中對細胞生存產(chǎn)生有害的成分和造成細胞不純的異物都應該視為污染。根據(jù)這一概念，組織培養(yǎng)污染物應包括生物（真菌、細菌、病毒和支原體）、化學物質(zhì)（影響細胞生存、非細胞所需的化學...

Alarmablue法檢測細胞活力2015/1/12

一、材料1.Resazurin細胞活力檢測試劑盒（Biotium，Inc.30025）2.細胞：在本試驗中，使用了三種人類前列腺癌細胞系進行檢測。（1）DU145（ATCC，HTB-81）（2）PC3...

細胞計數(shù)實驗2015/1/8

實驗目的：掌握細胞計數(shù)的方法。了解區(qū)分細胞存活狀態(tài)的方法。實驗用品：0.4%臺盼藍溶液、無水乙醇或95%乙醇溶液、脫脂棉普通顯微鏡、試管、吸管、毛細吸管、細胞計數(shù)板、綢布。實驗原理：在細胞培養(yǎng)工作中，...