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上海士鋒生物科技有限公司
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Alarmablue法檢測細胞活力

時間:2015/1/12閱讀:1216
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一、材料
1.  Resazurin細胞活力檢測試劑盒(Biotium,Inc.30025)

2.  細胞:在本試驗中,使用了三種人類前列腺癌細胞系進行檢測。
(1)DU145(ATCC,HTB-81)

(2)PC3(ATCC,CRL-1435)

(3)LNCap(ATCC,CRL-1740)
 
二、儀器
1.  SpectraPLUS酶標儀
 
三、步驟
1.  標準曲線制備:
(1)在96孔板中加入100 μL 培養(yǎng)基,然后接種適量細胞,貼壁細胞控制在40~10 000/孔,懸浮細胞控制在2 000~500 000/孔。用100 μL 不加入細胞的培養(yǎng)基作為空白對照。

(2)在培養(yǎng)基中加入10 μL resazurin溶液,37℃過夜培養(yǎng)細胞(1~24小時)。

(3)使用微量酶標儀分別檢測570 nm 和600 nm 下的吸光值。

(4)獲得每一個樣品的在OD570和OD600下的吸光值,制作標準曲線來確定試驗中的zui適細胞濃度。

2.  細胞活力分析:
(1)選擇zui適的細胞濃度,使用96孔板進行細胞培養(yǎng)。對于人類前列腺癌細胞DU145,PC3andLNcap,經(jīng)常使用的濃度是2 000-5 000/孔。

(2)根據(jù)你設(shè)計的試驗,在對應(yīng)的孔中加入相應(yīng)試劑對細胞進行處理一段時間。

(3)在培養(yǎng)基中加入10 μL resazurin溶液,37℃過夜培養(yǎng)細胞(1-24小時)。

(4)使用微量酶標儀分別檢測570 nm 和600 nm 下的吸光值。

(5)獲得每一個樣品的在OD570和OD600下的吸光值,區(qū)分處理的樣品和對照樣品的吸光值,將對照樣品的吸光值設(shè)置為100%來計算處理后細胞的活力。

(6)細胞活力=(檢測樣品的OD值)/(對照樣品的OD值)x100%

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