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當(dāng)前位置:上海士鋒生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>士鋒生物脂肪的堿水解及組分鑒定
中性脂肪為脂肪酸和甘油形成的酯。在酸、堿或酯酶的作用下可發(fā)生水解。如以堿作催化劑,產(chǎn)物是甘油和能溶于水的鹽類(即皂),此過程即為皂化作用。
皂用酸水解可產(chǎn)生不溶于水的脂肪酸。
甘油與脫水(諸如P 20 5,CaCl2,KHS04,無水Na 2SO4共熱,或單獨加熱到450℃以上時可脫水形成,它具有特殊氣味,可辨別。可將銀離子還原成金屬銀。
化學(xué)反應(yīng)式如下:
三、儀器和試劑
儀器
漏斗、錐形瓶、蒸發(fā)皿、沸水浴鍋等。
試劑
1. 脂肪(豬油或其它脂肪)
2. 95%乙醇
3. 濃鹽酸
4. 乙
5. 苯
6. 氯化鈣
7. 甘油
8. 40%(W/V)NaOH 溶液
9. AgNO3溶液
10. 石蕊試紙等
四、操作步驟
(一)皂化作用
取0.7g 豬油(液體約30滴)于100mL 錐形瓶中,加10mL0.5mol/L 氫氧化鈉—乙醇溶液,在瓶口上插一小漏斗,漏斗上再蓋一塊玻璃,然后在沸水浴中加熱約1小時。反應(yīng)完成后移去漏斗,繼續(xù)加熱除去乙醇。再加人10mL 蒸餾水,加熱,使皂化物溶解成混合液。
(二)脂肪酸與甘油的分離
上述溶液,加濃鹽酸(約5mL)使之呈酸性,加熱,可見脂肪酸呈油狀浮于上層時,用分液漏斗分開上下層。上層用熱水重復(fù)洗滌三次,每次用水100m1,除去混雜于脂肪中的無機鹽、甘油、鹽酸等,靜置澄清,上清液即為脂肪酸。
下層(即分層脂肪酸時的水層)置蒸發(fā)皿中于蒸汽浴上蒸干,加入少量乙醇(約5~l0mL),再蒸干,殘留物大部分為NaCl 及少量甘油,用35mL 乙醇.分3次提取并略加熱以助提取*,合并3次所得提取液,置蒸發(fā)皿內(nèi),在水浴上蒸發(fā)至漿狀。
(三)甘油的鑒定及脂肪酸的性質(zhì)
取分離出的甘油少許于試管中,加少量CaCl2或KHSO4混勻。小心加熱,注意氣味變化,或取一濾紙條,滴上數(shù)滴AgN03液及數(shù)滴氨水,格此濕紙條掛在試管口,注意氣味及濾紙的變化。取分離出的脂肪酸置烘箱中(90~95℃)干燥,檢驗脂酸在水、乙及苯中的溶解度。再取一點脂酸用95%乙醇溶解,用石蕊試紙檢驗其酸堿性。
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