轉(zhuǎn)氨基作用廣泛地存在于機(jī)體各組織器官中，是體內(nèi)氨基酸代謝的重要途徑。氨基酸反應(yīng)時均由專一的轉(zhuǎn)氨酶催化，此酶催化氨基酸的α－氨基轉(zhuǎn)移到另一α－酮基酸上。各種轉(zhuǎn)氨酶的活性不同，其中肝臟的谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Glutamic Pyruvic Transaminase ,GPT）活性較高，它催化如下反應(yīng)： 
α—酮戊二酸 + 丙氨酸 用紙層析法鑒定轉(zhuǎn)氨酶的轉(zhuǎn)氨基作用 谷氨酸 + 丙酮酸 
本實(shí)驗(yàn)以丙氨酸和α-酮戊二酸為底物，加肝勻漿保溫后，用紙層析法檢查谷氨酸的出現(xiàn)，以證明轉(zhuǎn)氨基作用。 
紙層析屬于分配層析。以濾紙為支持物，濾紙纖維與水親合力強(qiáng)，能吸收20~22 %的水。而且其中6~7 %的水是以氫鍵形式與纖維素的羥基結(jié)合，在一般情況下很難脫去，而濾紙纖維與有機(jī)溶劑的親和力甚弱。所以紙層析是以濾紙纖維結(jié)合水作為固定相，以有機(jī)溶劑作為流動相。在用紙層析法分離氨基酸時，由于各種氨基酸在此二相中的分配系數(shù)不同，各有一定的遷移率。極性弱的氨基酸，易溶于有機(jī)溶劑即分配系數(shù)小，隨流動相移動較快，Rf值大；而極性強(qiáng)的氨基酸相反，據(jù)此可以分離鑒定氨基酸。 
本實(shí)驗(yàn)用圓濾紙進(jìn)行水平型層析，除待測液外，點(diǎn)加對照液和標(biāo)準(zhǔn)液，層析后用茚三酮法顯色，對此觀察色斑，判定結(jié)果。 
【器材】 
玻璃勻漿器、離心管、10ml試管、培養(yǎng)皿、表面皿、沸水浴鍋、37℃恒溫水浴箱、10cm圓濾紙、吹風(fēng)機(jī)、手術(shù)剪刀。 
【試劑】 
1．0.01mol/L pH 7.4磷酸鹽緩沖液。 
2．0.2mol/L Na2HPO4溶液81ml與0.2mol/L NaH2PO4溶液19ml混勻,用蒸餾水稀釋20倍。 
3．0.1mol/L丙氨酸溶液 
稱取丙氨酸0.891克,先溶于少量0.01mol/L pH 7.4磷酸鹽緩沖液中,以1.0 N NaOH仔細(xì)調(diào)至pH7.4后, 加磷酸鹽緩沖液至100ml。 
4． 0.1mol/Lα－酮戊二酸 
稱取α－酮戊二酸1.461克,先溶于少量0.01mol/L pH 7.4磷酸鹽緩沖液中，以1.0 N NaOH仔細(xì)調(diào)至pH 7.4 后，加磷酸鹽緩沖液至100ml。 
5．0.1mol/L 谷氨酸溶液 
稱取谷氨酸0.735克,先溶于少量0.01mol/LpH 7.4磷酸鹽緩沖液中，以1.0 N NaOH仔細(xì)調(diào)至pH 7.4 后, 加磷酸鹽緩沖液至50 ml。 
6．0.5%茚三酮溶液 
稱取茚三酮0.5克于100 ml丙酮中溶解。 
7．層析溶劑 
酚：水= 4：1（V/V）混勻備用?，F(xiàn)用現(xiàn)配。 
【基本操作】 
1．勻漿制備：取新鮮動物肝0.5克,剪碎后放入勻漿器,加入冷0.01mol/LpH 7.4磷酸鹽緩沖液1.0 ml,迅速研成勻漿,用上述緩沖液3.5ml混勻備用。 
2．酶促反應(yīng)過程 
（1）取離心管兩支，編號：1（測定管）、2（對照管），各加肝勻漿0. 5ml。把對照管放沸水浴中加熱5分鐘，取出冷卻。 
（2）各加0.1mol/L丙氨酸0.5 ml, 0.1mol/Lα-酮戊二酸0.5 ml,0.01mol/L pH 7.4磷酸鹽緩沖液1.5 ml,搖勻。 
（3）37℃保溫，1小時后取出。