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　　化妝品體內哺乳動物細胞微核試驗主要是通過檢測動物骨髓或外周血紅細胞中微核的形成情況，評估化妝品是否引起成紅細胞染色體或有絲分裂器的損傷。微核是細胞分裂時，染色體片段或整條染色體因損傷而未能正常進入子細胞核，在細胞質中形成的圓形或橢圓形小體。通過檢測動物特定細胞（如骨髓嗜多染紅細胞）中的微核數(shù)量，可間接反映受試物對染色體的損傷程度，進而評估其潛在致突變風險。

　　化妝品體內哺乳動物細胞微核試驗方法

　　1.實驗動物：常規(guī)選擇小鼠或大鼠，小鼠體重一般為25g-30g，大鼠體重為150g-200g。實驗動物及實驗動物房應符合國家相應規(guī)定。

　　2.劑量分組：一般取受試物LD50的1/2、1/5、1/10、1/20等劑量，以求獲得微核的劑量-反應關系曲線。當受試物的LD50大于5g/kg體重時，可取5g/kg體重為最高劑量，一般至少設3個劑量。每個劑量組10只動物，雌、雄性各半。另外，還應設溶劑對照和陽性物對照組，常用環(huán)磷酰胺作為陽性物對照，劑量可為40mg/kg體重。

　　3.染毒途徑和方式：染毒途徑視實驗目的而定，建議采用經(jīng)口灌胃方式。采用30h兩次給藥法，即兩次給受試物間隔24h，第二次給受試物后6h取材。

　　4.骨髓的制取：動物頸椎脫臼處死后，打開胸腔，沿著胸骨柄與肋骨交界處剪斷，剝掉附著其上的肌肉，擦凈血污，橫向剪開胸骨，暴露骨髓腔，然后用止血鉗擠出骨髓液。

　　5.涂片：將骨髓液滴在載玻片一端的小牛血清液滴里，仔細混勻。一般來講，兩節(jié)胸骨髓液涂一張片子為宜。然后，按血常規(guī)涂片法涂片，長度約2cm-3cm，在空氣中晾干。

　　6.固定：將干燥的涂片放入甲醇液中固定5min。即使當日不染色，也應固定后保存。

　　7.染色：將固定過的涂片放入Giemsa應用液中，染色10min-15min，然后立即用1/15mol/L磷酸鹽緩沖液沖洗。

　　8.封片：用濾紙及時擦干染片背面的水滴，再用雙層濾紙輕輕按壓染片，以吸附染片上殘留的水分，再在空氣中晃動數(shù)次，以促其盡快晾干，然后放入二甲苯中透明5min，取出滴上適量光學樹脂膠，蓋上蓋玻片，寫好標簽。

　　9.觀察與計數(shù)：先用低倍鏡，后用高倍鏡粗略檢查，選擇細胞分布均勻，細胞無損，著色適當?shù)膮^(qū)域，再在油浸鏡下計數(shù)。每只動物至少計數(shù)1000個嗜多染紅細胞。微核率指含有微核的嗜多染紅細胞數(shù)，以千分率（‰）表示之。若一個嗜多染紅細胞中出現(xiàn)兩個或兩個以上微核，仍按一個有微核細胞計數(shù)。