人肺腺癌細(xì)胞Calu-3細(xì)胞株來源
一、實(shí)驗(yàn)原理
在以微生物為材料的遺傳學(xué)研究中，用某些物理因素或化學(xué)因素處理細(xì)菌，使基因發(fā)生突變，喪失合成某一物質(zhì)（如氨基酸、維生素、核苷酸等）的能力，因而它們不能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，必須補(bǔ)充某些物質(zhì)才能生長(zhǎng)。這樣從野生型經(jīng)誘變篩選得到的菌株，稱為營(yíng)養(yǎng)缺陷型。篩選營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株必須經(jīng)過以下幾個(gè)步驟：誘變處理、淘汰野生型、檢出缺陷型、鑒定缺陷型。由于本實(shí)驗(yàn)是以大腸桿菌為材料，所以根據(jù)細(xì)菌的特性分別說明篩選的步驟。
誘變劑的作用主要是提高突變頻率，它分為物理和化學(xué)的二類。物理誘變劑常用的有X射線、紫外線、快中子、γ射線等誘變處理首先是選擇誘變劑，微生物誘變中zui常用的物理誘變劑是紫外線。
誘變劑所處理的微生物，一般要求呈單核的單細(xì)胞或單孢子的懸浮液，分布均勻，這樣可以避免出現(xiàn)不純的菌落。用于誘變處理的微生物一般處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，那時(shí)的細(xì)菌對(duì)誘變劑的反應(yīng)zui靈敏。
誘變處理必須選擇合適的劑量，劑量的表示有二種，劑量和相對(duì)劑量。劑量的單位以爾格/cm2表示，一般用相對(duì)劑量。相對(duì)劑量與三個(gè)因素有關(guān)，這三個(gè)因素是：誘變?cè)春吞幚砦⑸锏木嚯x，誘變?cè)矗ㄗ贤鉄簦┑墓β?，以及處理的時(shí)間。前二個(gè)因素是固定的，所以通過處理時(shí)間控制誘變劑量。各種微生物的處理zui適劑量是不同的，須經(jīng)預(yù)備實(shí)驗(yàn)確定。
經(jīng)處理以后的細(xì)菌，缺陷型還是相當(dāng)少的，必須設(shè)法淘汰野生型細(xì)胞，提高營(yíng)養(yǎng)缺陷型細(xì)胞所占比例，以達(dá)到濃縮缺陷型的目的。細(xì)菌中常用的濃縮法是青霉素法。青霉素是殺菌劑，它只殺死生長(zhǎng)的細(xì)胞，對(duì)不生長(zhǎng)的細(xì)胞沒有致死作用。所以在含有青霉素的基本培養(yǎng)基中野生型能長(zhǎng)而被殺死，缺陷型不能長(zhǎng)被保存得以濃縮。
檢出缺陷型的方法有逐個(gè)測(cè)定法、夾層培養(yǎng)法、*補(bǔ)給法、影印培養(yǎng)法。這里主要以逐個(gè)測(cè)定法為例進(jìn)行說明。把經(jīng)過濃縮的缺陷型菌液接種在*培養(yǎng)基上，待長(zhǎng)出菌落后將每一菌落分別接種在基本培養(yǎng)基和*培養(yǎng)基上。凡是在基本培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)而在*培養(yǎng)基上能長(zhǎng)的菌落就是營(yíng)養(yǎng)缺陷型。
經(jīng)初步確定為營(yíng)養(yǎng)缺陷型的菌用生長(zhǎng)譜法鑒定。在同一培養(yǎng)皿上測(cè)定一個(gè)缺陷型對(duì)多種化合物的需要情況。
人肺腺癌細(xì)胞Calu-3細(xì)胞株來源二、實(shí)驗(yàn)材料
大腸桿菌K12的野生型菌株大腸桿菌（Escherichiacoli）K12SF+。
人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞095-D
人肺鱗癌細(xì)胞SK-MES-1
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H661
人肺黏液上皮樣癌細(xì)胞NCI-H292
人肺退行性癌細(xì)胞Calu-6
人肺腺癌細(xì)胞NCI-H1395
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H358
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞HCC827
人典型小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H1688
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H1299
人胚肺二倍體細(xì)胞2BS
人支氣管上皮樣細(xì)胞BEAS-2B
人胚肺成纖維細(xì)胞CCC-HPF-1
人胚胎氣管組織來源細(xì)胞CCC-HBE-2
人肺腺癌細(xì)胞Calu-3
人肺退行性癌細(xì)胞Calu-6
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞DMS 153
人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞95-D
人低分化肺腺癌細(xì)胞GLC-82
人肺細(xì)胞HLF-a
人胚肺二倍體細(xì)胞HEL-1
人胚肺二倍體細(xì)胞HEL-2
人肺癌細(xì)胞H1299
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞HCC827
人胚肺二倍體細(xì)胞KMB-17
人胚肺細(xì)胞系KuMA
人肺鱗癌細(xì)胞LTEP-s
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞LTEP-sm
人肺鱗癌瘤株LTEP-s
人肺腺癌細(xì)胞LTEP-a-2
人肺腺癌細(xì)胞Lu-165
三、實(shí)驗(yàn)器具和藥品
1.用具：滅菌培養(yǎng)皿（9厘米），滅菌三角燒瓶（150毫升），滅菌吸管（1.5毫升），滅菌離心管。
2.培養(yǎng)基：
（1）肉湯液體培養(yǎng)基：牛肉膏0.5克，蛋白胨1克，NaCl0.5克，蒸餾水100毫升，pH7.2，高壓滅菌15磅/英寸215分鐘。
（2）肉湯液體培養(yǎng)基（ZE）：牛肉膏0.5克，蛋白胨1克，NaCl0.5克，蒸餾水50毫升，pH7.2，高壓滅菌15磅/英寸215分鐘。
（3）基本液體培養(yǎng)基：Vogel50×2毫升，葡萄糖2克，蒸餾水98毫升，pH7.0，高壓滅菌8磅/英寸230分鐘。
