STEMCELL 干細(xì)胞技術(shù)
建議用下列方法恢復(fù)培養(yǎng)冷凍干燥保藏的菌種。
－、安瓶管開(kāi)封
1．用浸過(guò)70％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管。
2．用火焰將安瓿管頂端加熱。
3．滴無(wú)菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開(kāi)裂。
4．用挫刀或鑷子敲下已開(kāi)裂的安瓿管的頂端。
二、菌株恢復(fù)培養(yǎng)
1．用無(wú)菌吸管，吸取0.3～0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴人安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍于菌體溶解呈懸浮狀。
2．取0.1～0.2ml菌體懸浮液，移植于適宜的瓊脂斜面／平板培養(yǎng)基上，剩余的菌液，注入適宜的液體培養(yǎng)基內(nèi)，然后在建議的溫度下培養(yǎng)。
3．若未能活化，或活化后有疑問(wèn)時(shí)，請(qǐng)于收到菌種1個(gè)月內(nèi)，通知保藏中心，經(jīng)查證無(wú)誤后，即免費(fèi)STEMCELL 干細(xì)胞技術(shù) 補(bǔ)寄。
三、注意事項(xiàng)
1．菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在6一10℃的環(huán)境下。
2．厭氧菌的培養(yǎng)，如無(wú)特別說(shuō)明，自開(kāi)封至接種完成，均需以無(wú)氧氣體充填，以保持厭氧狀態(tài)。
3．某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后，延遲期較長(zhǎng)，需連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)，此時(shí)請(qǐng)將步驟二(2)重復(fù)一次。
液氮超低溫保藏程序
1、容器的選擇：使用帶螺旋蓋的2ml塑料安培瓶。
STEMCELL 干細(xì)胞技術(shù) 2、檢查安培瓶是否滲漏：用0.05%的亞甲基藍(lán)水溶液在4℃浸泡30-45分鐘，沖洗干凈，棄去含有藍(lán)色染料的安培瓶，其余的安培瓶備用。
3、打印標(biāo)簽（激光打?。?br />4、容器的滅菌：先用蒸餾水漂洗干凈安培瓶，再用蒸餾水在滅菌鍋中121℃浸泡滅菌15分鐘，干燥并將打印好的標(biāo)簽放入安培瓶中，略擰緊螺旋蓋，再行121℃滅菌30分鐘。
5、保藏菌菌齡：處于zui大生長(zhǎng)量階段或?qū)?shù)生長(zhǎng)期后期。
6、保護(hù)劑：選用5-10%的甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑。
1）甘油的準(zhǔn)備：在121℃滅菌15分鐘，2-8℃貯存。甘油一般以兩倍zui終所需濃度的水溶液保存，然后與同等量的細(xì)胞懸液混合。若不用細(xì)胞懸液，則以zui終所需濃度的水溶液保存。
2）二甲基亞砜：用0.22um的聚四氟乙烯過(guò)濾膜過(guò)濾除菌。過(guò)濾膜預(yù)先用甲醇和二甲基亞砜漂洗。無(wú)菌的二甲基亞砜以10-15ml裝量2-8℃避光保存。
7、分裝：在無(wú)菌條件下，將細(xì)胞懸液（從平板上打下直徑為5cm的菌塊）分裝于安培瓶中，并注入保護(hù)劑，擰緊螺旋蓋。
8、將安培瓶固定在鋁夾上，貼好標(biāo)簽。為了便于取用，一般一個(gè)鋁夾上僅放一個(gè)菌株。
9、將控溫系統(tǒng)先預(yù)冷到4℃，再將鋁夾放入其中。以每分鐘1℃降溫至-40℃，然后以每分鐘10℃降溫至-90℃。降溫以后，將鋁夾轉(zhuǎn)移至處于液氮中的儲(chǔ)存器中保存。
10、菌種的復(fù)活：將液氮保藏的菌種取出，迅速放入37℃水浴中解凍。一般需2至2.5分鐘,等*解凍后，再及時(shí)轉(zhuǎn)接到合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
STEMCELL Technologies Inc.（加拿大干細(xì)胞技術(shù)有限公司）是一家的生物科技公司，在研發(fā)、生產(chǎn)和銷售用于生命科學(xué)領(lǐng)域的高品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)化組織培養(yǎng)基、細(xì)胞分選試劑及儀器產(chǎn)品方面位于世界，經(jīng)營(yíng)范圍多達(dá)70多個(gè)國(guó)家。自1993年起，我公司產(chǎn)品已成功應(yīng)用于支持多個(gè)領(lǐng)域的前沿科學(xué)研究，如干細(xì)胞生物學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞治療，再生醫(yī)學(xué)，組織工程學(xué)及藥物研發(fā)等方向。
zui近，STEMCELL Technologies 榮獲了2011年生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)獎(jiǎng)（Life Science IndustryAwards）授予的“干細(xì)胞研究的突破性產(chǎn)品獎(jiǎng)”（Breakthrough Product in Stem CellResearch）。除了獲獎(jiǎng)的干細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品外，STEMCELL Technologies還提供*、操作簡(jiǎn)單的細(xì)胞分選產(chǎn)品，允許研究者輕松快捷地分選幾乎所有類型的細(xì)胞（包括免疫、造血、乳腺、間充質(zhì)、及腫瘤細(xì)胞）。利用STEMCELL Technologies 提供的個(gè)性化培訓(xùn)課程、量身定制試劑和及時(shí)有效的，讓科學(xué)家們更能取得高度一致的科研結(jié)果。
