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質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn): ATCC細(xì)胞,傳代細(xì)胞,BD培養(yǎng)基,菌種,科研抗體

 1.空白孔（只加顯色劑和終止液）的吸光度值應(yīng)不大于0.08.
 2.陽性對照（PC）A450值大于0.30.
 3.陰性對照平均A450值小于0.08，如果質(zhì)控是有效的，實(shí)驗結(jié)果就是有效的。  
結(jié)果判定:
1.每個實(shí)驗結(jié)果獨(dú)立使用，通過（Cut off）值判定結(jié)果。
2.計算臨界值：Cut off (C.O) =0.10+陰性對照平均（NC）A450值（當(dāng)陰性平均A450值小于0.05時，按0.05計算；當(dāng)陰性平均A450值大于或等于0.05時按實(shí)際值計算）。
3.陰性結(jié)果：標(biāo)本吸光度值﹤臨界值為陰性。陽性結(jié)果：標(biāo)本吸光度值≧臨界值為陽性。

標(biāo)本采集、保存和運(yùn)輸:
1.適用標(biāo)本類型：血清或血漿。血清中的內(nèi)源性干擾物如血脂、膽紅素、血紅蛋白在通常情況下不會影響實(shí)驗結(jié)果。RF因子陽性、孕婦、AFP陽性標(biāo)本不影響實(shí)驗結(jié)果，HAV、HCV、乙肝等相關(guān)疾病抗體陽性標(biāo)本通常情況下不影響實(shí)驗結(jié)果。
2. 標(biāo)本采集：
2.1 血清：用一次性無菌注射器抽取受檢者靜脈血2ml，注入一5ml無菌的干燥玻璃管中(或含有促凝劑)，室溫放置30min，2,000rpm離心3min，吸取上層血清，轉(zhuǎn)移至一潔凈的1.5ml離心管中，密閉送檢。血清樣本中混濁或有沉淀的樣本應(yīng)先離心或過濾后取澄清的液體進(jìn)行檢測，如果未充分沉淀，懸浮的纖維蛋白可能引起假陽性。
2.2 血漿：用一次性無菌注射器抽取受檢者靜脈血2ml，注入一5ml無菌的含有Na2EDTA或枸櫞酸鈉抗凝劑的玻璃管中立即輕輕顛倒玻璃管混勻5-10次以充分混勻，室溫放置30min，2,000rpm離心3min，吸取上層血漿，轉(zhuǎn)移至一潔凈的1.5ml離心管中，密閉送檢。標(biāo)本中含有EDTA、檸檬酸鈉、肝素鈉等抗凝劑時，不影響結(jié)果。
3.保存和運(yùn)輸：標(biāo)本儲存在2~8℃，一周內(nèi)不需要檢測的標(biāo)本應(yīng)儲存在-20℃以下低溫冷凍保存，需長期保存的標(biāo)本存于-70℃冰箱，避免反復(fù)凍融。血清的運(yùn)送應(yīng)在2~8℃條件下由專人運(yùn)送，由專人打開樣本的包裝，記錄相關(guān)信息，核對送檢樣本編號是否與送檢單一致，填寫樣本接受單。冷凍樣本實(shí)驗前需要恢復(fù)到室溫（平衡30分鐘）并混勻。

使用方法:
1.取出試劑盒置室溫平衡30分鐘。將20×洗滌液用蒸餾水做20倍稀釋。
2.加樣品：將待檢血清做1：10稀釋（取100μl標(biāo)本稀釋液加入反應(yīng)板孔內(nèi)，再加10μl待檢血清）混勻，同時預(yù)留陰、陽性及空白對照共5孔。
3.加入陰性對照3孔，陽性對照1孔，各100μl對照血清。空白對照1孔空置。將反應(yīng)板輕輕震蕩使樣品混勻。
4.溫育：用封板膜封板后，置37℃溫箱或水浴中反應(yīng)30分鐘。
5.洗板：溫育后，將封板膜揭掉，吸干孔內(nèi)液體，用洗滌液洗板5次，每次浸泡30-60秒鐘。
6.加酶標(biāo)工作液：每孔加入100μl酶標(biāo)工作液，空白孔除外。
7.溫育：用封板膜封板后，置37℃溫箱或水浴中反應(yīng)30分鐘。
8.洗板：溫育后，將封板膜揭掉，吸干孔內(nèi)液體，用洗滌液洗板5次，每次浸泡30-60秒鐘。
9.顯色：每孔加底物A、B液各50μl，輕輕震蕩混勻，用封板膜封板后，置37℃溫箱或水浴中反應(yīng)10分鐘。
10.終止：每孔加入終止液50μl，輕輕震蕩混勻。
11.測定：設(shè)定酶標(biāo)儀波長于450nm（建議雙波長450/630nm檢測），測定各孔A450值。注意：在終止反應(yīng)30分鐘內(nèi)讀數(shù)。
12.當(dāng)使用單波長時，校準(zhǔn)空白孔，設(shè)定酶標(biāo)儀波長于450nm，測定各孔A450值，當(dāng)使用雙波長450/630nm檢測時，可以不設(shè)空白孔，測定各孔A值。