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中文名：Hoechst33258染色液(1mg/ml)

供應(yīng)商：上海遠慕

規(guī)格：1ml

分類：細胞染色

保存：—20℃,避光,12個月

用途：細胞凋亡檢測，普通細胞核染色，常規(guī)的DNA染色。

說明：Hoechst33258染色中l(wèi)eagene公司推薦采用該試劑；Hoechst33258是一種熒光染料，可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低；染色染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測，可直接用于固定細胞或組織的細胞核染色，也可直接用于活細胞或組織的細胞核染色。

Hoechst33258染色液(1mg/ml)

Hoechst33258染色液(1mg/ml)操作步驟：

1、固定的組織細胞染色

a.對于細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑；隨后如果需要進行免疫熒光染色，則先進行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進行Hoechst33258染色；如果不需要進行其它染色，則直接進行后續(xù)的Hoechst33258染色。

b.對于貼壁細胞或組織切片，加入少量Hoechst 33258工作液，覆蓋住樣品即可；對于懸浮細胞，至少加入待染色樣品3倍體積的工作液，混勻；室溫放置3-5分鐘。

c.吸除Hoechst33258染色液，用TBST，PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

d直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察；細胞發(fā)生凋亡時，會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。

2、活細胞染色

a.根據(jù)實驗具體要求，用無菌去離子水稀釋到自己所需濃度，即為Hoechst33258染色工作液；細胞核染色時，一般推薦工作濃度為1～5μg/ml。

b.取96，24，6孔板培養(yǎng)細胞至合適狀態(tài)；按96孔板加入100μl，24孔板加入500μl，6孔板加入1ml的比例，加入適當?shù)腍oechst33258染色液，染液必須充分覆蓋細胞。

c.在適宜于細胞培養(yǎng)的條件下培養(yǎng)。

d,輕輕吸除Hoechst33258染色液。

e.用無菌的PBS或生理鹽水清洗2～3次。

f.進行熒光檢測。

Hoechst33258染色液(1mg/ml)注意事項：

1、Leagene Hoechst33258染色液(1mg/ml)應(yīng)稀釋至合適的濃度后使用。

2、熒光染料都存在淬滅的問題，為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光衰減封片劑；建議染色后盡量當天完成檢測，活細胞或組織染色后應(yīng)立即觀察。

3、避免反復(fù)凍融，否則容易失效。

4、Hoechst33258對人體有一定刺激性，請注意適當防護。

5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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