一、基本知識與原理 
轉(zhuǎn)導(dǎo)是以噬菌體為媒介將一個細胞的遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移給另一個細胞的過程。隨著分子遺傳學(xué)的發(fā)展，轉(zhuǎn)身已成為基因精細結(jié)構(gòu)分析的常用方法之一。 
根據(jù)噬菌體轉(zhuǎn)導(dǎo)供體菌基因的差異，轉(zhuǎn)導(dǎo)可分為普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)和局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)。這里以局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)為例說明轉(zhuǎn)導(dǎo)的基本原理。局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)實驗中常用的是大噬菌體，它能整合在大腸桿菌染色體DNA上的半乳糖基因（gAl）和生物素基因（bib）之間，因此，它能轉(zhuǎn)導(dǎo)半乳糖基因（一）又能轉(zhuǎn)導(dǎo)生物素基因（bio）。 
本實驗選用大腸桿菌 E。oh K．2（A）為供體菌（即大噬菌體的DNA已整合在大腸桿菌的DNA上，我們稱該大腸桿菌為溶源性大腸桿菌，’gAT””為帶有半乳糖基因）。由于在此供體菌中噬菌體與半乳糖基因（匆”）緊密連鎖，因此，當此供體菌受紫外線照射后會產(chǎn)生裂解反應(yīng)，噬菌體被誘發(fā)釋放，以一定的比例形成帶有半乳糖基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體。當這種轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體與受體菌 ECo］i K；。 s gAl－（此細菌不能利用半乳糖，‘’表示此細菌半乳糖基因發(fā)生突變）混合接觸時，帶有一基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體能以一定的頻率整合到受體首上，從而使不能利用半乳糖的 gAl一受體菌轉(zhuǎn)變成了能利用半乳糖的 gAT”細菌。整個過程可用圖12－’表示：l 
二、實驗?zāi)康暮鸵?nbsp;
以局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)為例來說明轉(zhuǎn)導(dǎo)的基本原理，進一步驗證是遺傳物質(zhì)，并初步掌握轉(zhuǎn)導(dǎo)實驗的基本方法。 
三、實驗器材 
（1）實驗材料：供體菌 受體菌 
（2）實驗試劑：肉湯液體培養(yǎng)基、肉湯固體培養(yǎng)基、ZE 肉湯液體培養(yǎng)基、半固體瓊脂培養(yǎng)基、半乳糖Emb培養(yǎng)基、滅菌生理鹽水（或磷酸緩沖液） 
D（3）實驗設(shè)備：培養(yǎng)皿（9厘米）、三角燒瓶（50毫升）、試管、離心管，離心機，移液管，涂棒，水浴鍋，離心機，紫外照射箱、溫箱 
四、實驗方法與步驟 
1 噬菌體的誘導(dǎo)和裂解液的制備 
（1）供體菌的活化與培養(yǎng)，取—環(huán)供體菌，接種于盛有sml肉湯液體培養(yǎng)基的三角瓶中37度培養(yǎng)16h后，吸取0.5毫升菌液，接種于盛有肉4.5毫升肉湯液體培養(yǎng)基的三角瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)4～6小時。 
（2）制備懸浮液將三角瓶中的菌液倒人離心管，以 3 500 rlmlN， 離心 10 miN。離心后，除去上清液，加 4ml磷酸緩沖液，混勻沉淀，再以 3 smr/miN，離心 10。i。，這樣反復(fù)洗三次，制備成懸浮液。 
（3）誘導(dǎo)裂解：取懸浮液 3。；i于培養(yǎng)皿中，經(jīng) UV處理（15 W，距離 40Cm），誘導(dǎo) 10－20。 
（4）避光培養(yǎng)； UV處理后，加人 3 ml ZE肉湯液體培養(yǎng)基，為了防止光復(fù)活，立即置于37 T避光培養(yǎng) 2－3 h． 
（5）制備裂解液：吸取培養(yǎng)物于離心管中，以 3 500 r/rUiN，離心 10 miN，吸取上清液，再加人02 ml氯仿（4－5滴），激烈振蕩30 s，靜置5 mlN，再次以 3 55 r/miN，離心 10 mlN，小心把上清波用無菌吸管轉(zhuǎn)移到另一試管，這就是噬菌體（A） gAl”的裂解液。 
2轉(zhuǎn)導(dǎo)方法 
（l）點滴法：①取倒好Emb培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿2只，在皿底用記號筆按圖中的樣子 畫好。 
②取一滿環(huán)受體菌，涂出一條菌帶，共涂二條， 37 T培養(yǎng) 15 ho ＠取出培養(yǎng)皿 
在2個圓圈和四個方格處，各加一環(huán)噬菌體裂解液，2個圓圈作為對照，四個方格作為 
轉(zhuǎn)導(dǎo)處理，見圖 12—2，培養(yǎng) 2 D，觀察結(jié)果。 
3涂布法：①取倒好的Emb培養(yǎng)皿三只，先做好標記，其中一加 oJ ml噬菌體裂解液，用于對照Z一只加 oJ ml受體菌，也用于對照，一只加噬菌體裂解液和受體菌液各 005 ml、②用玻璃涂棒將各皿上的菌液（或噬菌體裂解液）涂開，相同的2只培養(yǎng)皿用同一根玻璃涂棒，37 T培養(yǎng) 2 D，觀察結(jié)果。