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植物血凝素也稱為植物凝集素(PHA),可自制也可購自商品。自制的方法常用生理鹽水提取法。
(A)干品制備法(1)選廣東雞子豆10g,用蒸餾水沖洗,置培養(yǎng)皿內(nèi)用75%酒精一次性浸洗,倒掉酒精留間隙置37℃。恒溫箱內(nèi)24-48小時(shí);(2)在無菌條件下研碎雞子豆,加生理鹽水30ml,搖勻后放入4℃冰箱24小時(shí),第二天再加生理鹽水70ml,再置4℃冰箱內(nèi)24小時(shí)。每8-12小時(shí)搖蕩一次。(也可一次性加100ml生理鹽水);(3)無菌條件下移入10-50ml離心管內(nèi),3000-4000rpm30分鐘。在無菌箱內(nèi)把上清液分裝于10ml小瓶,置冰箱冷凍層備用;(4)效價(jià):外周血染色體制備每100ml培養(yǎng)基加PHA約2ml。注:若整個(gè)過程未在無菌條件下進(jìn)行,分裝時(shí)用G5玻砂漏斗除菌即可。
?。˙)鮮品制備法:(1)選擇完整無破皮鮮菜豆20g,用75%酒精浸泡10分鐘;(2)在凈化工作中用無菌鹽水或蒸餾水漂洗二次,然后置無菌乳缽中搗成糊狀,用100ml無菌鹽水浸泡封口;(3)移入4℃冰箱中置24小時(shí),中間搖動(dòng)數(shù)次,次日3000rpm30分鐘,在無菌情況下分裝上清液于10ml小瓶內(nèi),置冰箱冷凍層備用。(4)效價(jià):正式使用前先用一定量作效價(jià)測定,按效價(jià)使用。
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