植物原生質(zhì)體融合和培養(yǎng)在理論和實踐上都有很大的意義，在植物遺傳工程和育種研究上具有廣闊的應用前景。它是植物同源、異源多倍體獲得的途徑之一，它不僅能克服遠緣雜交有性不親和障礙，也可克眼傳統(tǒng)的通過有性雜交誘導多倍體植株的麻煩，zui終將野生種的遠緣基因?qū)朐耘喾N中，原生質(zhì)體融合技術可望成為作物改良的有力工具之一。
植物原生質(zhì)體培養(yǎng)方法起源于植物單細胞的培養(yǎng)方法。1954年，植物單細胞培養(yǎng)才獲得成功。Mllir 培養(yǎng)的萬壽菊及煙草懸浮細胞植入到長有愈傷組織的培養(yǎng)基上得到了它們的單細胞克隆，并建立了看護培養(yǎng)的方法；1960年Jones等建立了微室培養(yǎng)法。同年，Cocking應用酶法分離原生質(zhì)獲得成功，從而在實驗條件下很容易獲得大量的原生質(zhì)體。隨著多種適用于原生質(zhì)體分離的商品酶的出現(xiàn)，原生質(zhì)體的培養(yǎng)方法也得到了不斷地改進，現(xiàn)在常用的原生質(zhì)體培養(yǎng)方法有：液體淺層培養(yǎng)法、雙層培養(yǎng)法、瓊脂糖包埋法、瓊脂島培養(yǎng)法以及使用條件培養(yǎng)基或飼喂培養(yǎng)等。

實驗目的：

了解植物原生質(zhì)體分離、融合和培養(yǎng)的基本原理及其過程

實驗原理：

　　植物原生質(zhì)體是除去細胞壁后為原生質(zhì)所包圍的“裸露細胞”，是開展基礎研究的理想材料。其中酶解法分離原生質(zhì)體是一個常用的技術，其原理是植物細胞壁主要由纖維素、半纖維素和果膠質(zhì)組成，因而使用纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶能降解細胞壁成分，除去細胞壁。

　　許多化學、物理學和生物學方法可誘導原主質(zhì)體融合，現(xiàn)在被廣泛采用并證明行之有效的融合方法是聚乙二醇(PEG)法。高Ca高pH法和電融合法：

　　PEG作為一種高分子化合物，20～50％的濃度能對原生質(zhì)體產(chǎn)生瞬間沖擊效應，原生質(zhì)體很快發(fā)生收縮與粘連，隨后用高Ca高pH法進行清洗．使原生質(zhì)體融合得以完成。

　　PEG誘導融合的機理：PEG由于含有醚鍵而具負極性，與水、蛋白質(zhì)和碳水化合物等一些正極化基團能形成氫鍵，當PEG分子足夠長時，可阼為鄰近原生質(zhì)表面之間的分子橋而使之粘連。PEG也能連接Ca2+等陽離子，Ca2+可在一些負極化基團和PEG之間形成橋，因而促進粘連。在洗滌過程中，連接在原生質(zhì)體膜上的PEG分子可被洗脫．這樣將引起電荷的紊亂和再分布．從而引起原生質(zhì)體融合：高Ca高pH由于增加了質(zhì)膜的流動性，因而也大大提高了融合頻率，洗滌時的滲透壓沖擊對融合也可能起作用。