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黃曲霉毒素B1檢測卡的實驗步驟

2022年04月13日 13:20廣州健侖生物科技有限公司點擊量:1128

需要設(shè)備及耗材:

1、儀器:均質(zhì)器 、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)。

2、微量移液器:單道20µl-200µl,100µl-1000µl。

3、試劑:甲醇,正己烷。

樣本準(zhǔn)備:

1、樣本處理前須知:實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實驗結(jié)果。

2、配液:配液1:樣本提取液    70%甲醇,即V甲醇:V去離子水=7:3。

3、樣本前處理步驟:

3.1 谷物、飼料

1)稱取2g粉碎樣本于離心管中,再根據(jù)不同的檢出限要求按下表加入樣本提取液

檢測下限

10ppb

20ppb

40ppb

100ppb

樣本提取液

2ml

4ml

8ml

20ml

振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。

2)取0.1ml上清,加入0.4ml去離子水,混勻備用。

3.2谷物、飼料(須吹干)

 若要求檢測下限為5ppb時,可按如下操作:

1)稱取2g粉碎樣本于離心管中,加入4ml樣本提取液,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘;

2)取1ml上層液體在50-60℃條件下用氮氣或空氣吹干;

3)先加入0.25ml 70%甲醇溶解剩下的殘留物,劇烈震蕩2分鐘;再加入1ml去離子水,混勻備用。(注意:這一步甲醇與水的加液順序不能顛倒)

         稀釋倍數(shù):2.5倍     檢測下限:5ppb

3.3糧油(菜油、麻油、色拉油、花生油等)

1)稱取2g樣本于離心管中,再根據(jù)不同的檢出限要求按下表加入樣本提取液

檢測下限

10ppb

20ppb

40ppb

100ppb

樣本提取液

2ml

4ml

8ml

20ml

然后加入8ml正己烷,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。

2)去除上層液體,取0.1ml下層液體加入0.4ml去離子水,混勻備用。

實驗步驟:

1、 撕開檢測卡鋁箔包裝袋,取出檢測卡,放于平整、潔凈的臺面上。

2 、用配套吸管吸取已準(zhǔn)備好的樣本液體,緩慢、逐滴的(應(yīng)避免泡沫產(chǎn)生)滴加4-5滴(約150ul)到加樣孔(S)內(nèi)。

3 、室溫下放置5-8分鐘判斷結(jié)果,超過30分鐘的結(jié)果無效。

結(jié)果判斷:

1.陰性:在觀察孔內(nèi),只有對照線區(qū)(C)出現(xiàn)一條紫紅色線。

2.陽性:在觀察孔內(nèi),檢測線區(qū)(T)及對照線區(qū)(C)同時出現(xiàn)紫紅色線。抗體滴度越高,檢測線(T)顏色越深。

3.失效:在觀察孔內(nèi),對照線區(qū)(C)不出現(xiàn)紫紅色線。(注: 去離子水、自來水、生理鹽水不能作為陰性對照。)

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