優(yōu)化雞ELISA試劑盒的重點(diǎn)之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號(hào)，從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留，在zui后一步產(chǎn)生信號(hào)。而不充分的洗滌會(huì)導(dǎo)致差異和高背景，從而帶來(lái)不理想的結(jié)果。
免疫分析，比如ELISA試劑盒，一般包含兩個(gè)或以上的孵育步驟，中間以洗滌隔開(kāi)。ELISA通常在96孔板中開(kāi)展，其上包被了結(jié)合抗原或抗體。在封閉步驟后，包被后的平板首先與一抗或抗原孵育。隨后通過(guò)一些洗滌步驟去除未結(jié)合（低親和力）的抗原-抗體復(fù)合物。接著，平板與二抗孵育。這種帶有酶的抗體與高親和力的抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合。之后，又是一輪洗滌。zui后是添加底物并檢測(cè)信號(hào)。
優(yōu)化ELISA試劑盒的重點(diǎn)之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號(hào)，從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留，在zui后一步產(chǎn)生信號(hào)。而不充分的洗滌會(huì)導(dǎo)致差異和高背景，從而帶來(lái)不理想的結(jié)果。本文將為你介紹一些利用自動(dòng)洗板機(jī)來(lái)洗滌ELISA平板的技巧。
雞ELISA試劑盒洗滌參數(shù)
一些參數(shù)會(huì)影響洗滌步驟的效果。*個(gè)主要的參數(shù)是洗滌量。自動(dòng)洗板機(jī)會(huì)分配洗滌液。如果你之前遭遇過(guò)高背景，那么不要猶豫，將洗滌量調(diào)為高，是比包被體積更高。太少的洗滌液會(huì)讓一部分分析表面洗滌不到，從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌量必須相同。ELISA板的制造商通常會(huì)在試劑盒的使用手冊(cè)中列出包被量。行業(yè)中通常使用的包被量是200 µl。如果你的試劑盒也是這樣，那么制造商可能會(huì)建議使用300 µl洗滌液進(jìn)行洗滌，以便清潔整個(gè)反應(yīng)孔的壁。一般來(lái)說(shuō)，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。
雞ELISA試劑盒洗滌次數(shù)的經(jīng)驗(yàn)法則
第二個(gè)影響洗滌效果的主要參數(shù)是洗滌循環(huán)的量。當(dāng)然，洗滌次數(shù)越多，背景越低。然而，太多次的洗滌會(huì)降低信號(hào)強(qiáng)度，使其難以測(cè)定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過(guò)，ELISA試劑盒板的制造商會(huì)對(duì)洗滌次數(shù)提出建議。一般而言，制造商包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶(hù)包被的平板要少。對(duì)于用戶(hù)包被的ELISA板，必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。
控制洗滌量和洗滌次數(shù)的另一種方法是加入過(guò)量的洗滌液。一般來(lái)說(shuō)，96孔板的每個(gè)孔能容納330至460 µl。不過(guò)，有些自動(dòng)化洗板機(jī)可設(shè)置程序，分配遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個(gè)量的洗滌液，比如1 ml。它是如何做到的呢？其實(shí)很簡(jiǎn)單，就是在分液的同時(shí)打開(kāi)吸液功能。換句話說(shuō)，隨著分液器分配更多的液體，抽吸器也將液體吸出。這種技術(shù)能增加洗滌量，但不會(huì)溢出到其他孔中。
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