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技術(shù)文章

豬勞森氏胞內(nèi)菌酶聯(lián)免疫分析定性

閱讀:472發(fā)布時(shí)間:2014-9-16

豬勞森氏胞內(nèi)菌酶聯(lián)免疫分析定性使用目的:

本試劑盒用于測(cè)定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中勞森氏胞內(nèi)菌表達(dá)。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中豬勞森氏胞內(nèi)菌表達(dá)。用純化的豬勞森氏胞內(nèi)菌抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中勞森氏胞內(nèi)菌相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的勞森氏胞內(nèi)菌抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中豬勞森氏胞內(nèi)菌的存在與否。

豬勞森氏胞內(nèi)菌酶聯(lián)免疫分析定性操作步驟

編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)

 

 

加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 
溫育:操作同3。
洗滌:操作同5。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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