過敏毒素C5(補體C5)抗原動物體內單抗的方法迄今為止,通常情況下均采用動物體內單抗的方法,鑒于絕大多數動物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細胞與同品系的脾細胞融合而得,因此使用的動物當然*BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細胞接種于小鼠腹腔內,在小鼠腹腔內生長雜交瘤,并產生腹水,因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高??梢娫摲ú僮骱啽?、經濟,不過,腹水中?;煊行∈蟮母鞣N雜蛋白(包括Ig),因此在很多情況下要提純后才能使用,而且還有污染動物病毒的危險,故而用SPF級小鼠。 過敏毒素C5(補體C5)抗原A、材料:a. 成年BALB/c小鼠。b. 降植烷(Pristane)或液體石蠟。c. 處于對數生*的雜交瘤細胞。
B、方法:a. 腹腔接種降植烷或液體石蠟,每只小鼠0.3-0.5ml。b. 7-10天后腹腔接種用PBS或無血清培養(yǎng)基稀釋的雜交瘤細胞,每只小鼠5×105/0.2ml。c. 間隔5天后,每天觀察小鼠腹水產生情況,如腹部明顯膨大,以手觸摸時,皮膚有緊張感,即可用16號針頭采集腹水,一般可連續(xù)采2-3次,通常每只小鼠可采5-10ml腹水;d. 將腹水離心(2000r/min 5分鐘),除去細胞成分和其他的沉淀物,收集上清,測定抗體效價,分裝,-70℃凍存?zhèn)溆?,或凍干保存?br /> 公司產品詳情請參閱有關詳細論述鏈接點擊:Human Lung resistance-related protein,LRP ELISA試劑盒
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(2) 體外培養(yǎng)單抗的方法總體上講,雜交瘤細胞系并不是嚴格的貼壁依賴細胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以進行單層細胞培養(yǎng),又可以進行懸浮培養(yǎng)。雜交瘤細胞的單層細胞培養(yǎng)法是各個實驗室zui常用的手段,即將雜交瘤細胞加入培養(yǎng)瓶中,以含10-15%小牛血清的培養(yǎng)基培養(yǎng),細胞濃度以1×106-2×106/ml為佳,然后收集培養(yǎng)上清,其中單抗含量約10-50ug/ml。顯然,這種方法制備的單抗量極為有限,無疑是不適用于單抗的大規(guī)模。要想在體外大量制備單抗,就必須進行雜交瘤細胞的大量(高密度)培養(yǎng)。單位體積內細胞數量越多,細胞存活時間越長,單抗的濃度就越高,產量就越大。