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制取抗體應(yīng)采用什么方法原理？
閱讀：1356 發(fā)布時間：2014-9-3 
抗體也是有著多種類型及不同種屬的，制取抗體應(yīng)采用什么方法原理？
免疫細(xì)胞化學(xué)的技術(shù)關(guān)鍵之一是制備特異性強(qiáng)、親合力大、滴度高的特異性抗體，由于每種抗原都有幾個抗原決定簇，用它免疫動物將產(chǎn)生對各個決定簇的抗體，即多克隆抗體。單克隆抗體免疫球蛋白屬同一類型，質(zhì)地純一，而且它是針對某一抗原決定簇的，因此特異性強(qiáng)，親合性也一致。
如何選擇正確的抗體制備技術(shù)？
從分離到表達(dá)：不同的抗體重組技術(shù)可以用于制備不同的抗體，工業(yè)上和學(xué)術(shù)界都發(fā)展了許多相關(guān)的技術(shù)，噬菌體展示就是其中的主導(dǎo)技術(shù)。昆蟲和哺乳動物細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)從理論上而言是相似的，但是其它的分子進(jìn)化類型需要重新提煉和分離抗體。
【抗血清質(zhì)量的評價(jià)】
1. 效價(jià)
放射免疫法：以不同稀釋度的抗血清與標(biāo)記抗原混合，孵育24h后，測定其結(jié)合率。通常以結(jié)合率為50%的血清稀度和為效價(jià)。如某抗血清的結(jié)合率為50%時的稀釋度為1：15000，則該血清的效價(jià)就是1：15000。抗血清的效價(jià)，除由抗血清本身的性質(zhì)決定外，還受標(biāo)記抗原的質(zhì)量、孵育時間，所用稀釋液的成分及其pH等因素的影響，在工作中必須引起注意。
雙向擴(kuò)散法：利用大分子抗原和抗體在瓊脂平板上擴(kuò)散，兩者在相交處產(chǎn)生沉淀線，以觀察和判斷抗血清中是否有抗體及其濃度。
球脂板的制備：100ml pH7.1 的磷酸鹽緩沖液加到15g的瓊脂內(nèi)，于水浴中加溫，攪拌，使瓊脂*溶解，趁熱用紗布過濾，待溶液冷卻到65℃左右時，加入疊氮鈉，使其在溶液中的濃度為0.1%。用移液管把瓊脂放在干凈平皿或玻片上，約3mm厚，待其冷卻，*凝固后，用打孔器打孔。中央孔內(nèi)加適量抗原，周圍各孔內(nèi)分別加入50μl 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32及不稀釋的抗血清，37℃下孵育24h，觀察有無沉淀線產(chǎn)生，以判斷血清的稀釋度。
2. 特異性測定
抗血清的特異性或稱專一性是指抗血清對相應(yīng)的抗原及近似的抗原物質(zhì)的識別能力。特異性好就是抗血清的識別能力強(qiáng)。通常，特異性是以交叉反應(yīng)率來表示的。交叉反應(yīng)率低，表示抗血清的特異性好，反之則特異性差。交叉反應(yīng)率一般是用競爭抑制曲線來判斷的。以不同濃度的抗原和近似抗原物質(zhì)分別做競爭抑制曲線，計(jì)算各自的結(jié)合率（B/T或B/B0），求出各自在IC50時的濃度，按下列公式計(jì)算交叉反應(yīng)率。
S=y/Z×100%
S：交叉反應(yīng)率，y：IC50時抗原濃度，Z：IC50時近似抗原物質(zhì)的濃度。
如某抗原的IC50濃度為90Pg/管，而一些近似抗原物質(zhì)IC50濃度幾乎是無限大，可以說這一抗血清與其它抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似零，即無交叉反應(yīng)，該抗血清的特異性是好的。
3. 親合力
在免疫學(xué)中，親合力是指抗體與結(jié)合抗原體的活度或牢固度?？贵w與抗原結(jié)合疏松，結(jié)合后會迅速解離，稱為親合力低，反之，親合力高。親合力的高低是由抗原分子的大小，抗體分子的結(jié)合位點(diǎn)與抗原的決定基之間的立體結(jié)構(gòu)型的合適程度決定的。親合力常以親合常數(shù)K表示。K的單位是升/摩爾。在RIA中，K是該抗血清能達(dá)到的zui小檢出量的倒數(shù)，K=1/[H]，[H]是zui小檢出量，通常，K的范圍在108～1012L/mol之間，也有高達(dá)1014L/mol的。
計(jì)算親合常數(shù)的方法20余種，計(jì)算出的K都不能真實(shí)反映實(shí)驗(yàn)情況，只能作為參考。
上海恒遠(yuǎn)生物嚴(yán)把產(chǎn)品質(zhì)量關(guān)，劣質(zhì)的抗體使得實(shí)驗(yàn)的可靠性常常得不到很好的保證，所以加快生物科研試劑的創(chuàng)新和發(fā)展，全面提升科研試劑的質(zhì)量，專業(yè)的銷售和技術(shù)服務(wù)團(tuán)隊(duì)，迎得了國內(nèi)外廠商的*，交流。