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EPCA2 進口檢測試劑盒

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產(chǎn)品型號48T/96T

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-04-14 20:28:56瀏覽次數(shù):294次

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9007-83-4γ-球(牛)細胞TUNEL顯色法(DAB)測定試劑

檢測目的:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本..需要而未提供

產(chǎn)品全稱:EPCA2 進口檢測試劑盒

英文名稱:EPCA2 ELISA kit

產(chǎn)品貨號:A096907

規(guī)格:48T/96T

服務(wù):公司產(chǎn)品僅用于科研可提供免費代測服務(wù),以及產(chǎn)品說明書和技術(shù)指導(dǎo)等

保存環(huán)境:2-8℃低溫、避光、防潮

主要成分:酶標板,試劑,標準品等

試劑盒組成及試劑配制

1. 酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。

2. 標準品(Standard):2瓶(凍干品)。

3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。

4. 標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。

5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。

6. 標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)

7. 辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)

8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。

9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

檢測程序:

1.  加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板:同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

6.  洗板:同前。

7.  每孔加入底物工作液100ul ,置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。

8.  每孔加入100ul 終止液混勻。

9.  30分鐘內(nèi)用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

 


QQ截圖20200429162339.jpg

樣本實驗前準備:

ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。

1)血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

2)血漿:

應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

3)尿液:

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

4)細胞培養(yǎng)上清:

檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。

5)培養(yǎng)細胞

檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

6)組織標本

切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

 

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操作流程:

1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。

2)酶標板置4℃,包被過夜。

3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。

6)洗板,同(4)。

7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。

9)洗板,同(4)。

10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。

11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。

12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。


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