細(xì)胞傳代步驟：

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠棕色脂肪干分離自棕色脂肪組織；動(dòng)物體內(nèi)存在棕色和白色兩種脂肪，白色脂肪堆積在皮下，負(fù)責(zé)儲(chǔ)存多余熱量；棕色脂肪負(fù)責(zé)分解引發(fā)肥胖的白色脂肪，將后者轉(zhuǎn)化成二氧化碳、水和熱量，本身不儲(chǔ)存熱量。棕色脂肪組織呈棕色，其特點(diǎn)是組織中有豐富的毛細(xì)血管，脂肪細(xì)胞內(nèi)散著許多小脂滴，線粒體大而豐富，核圓形，位于細(xì)胞中央，這種脂肪細(xì)胞也稱(chēng)為多泡脂肪細(xì)胞。棕色脂肪組織在成年動(dòng)物極少，新生兒及冬眠動(dòng)物較多，在新生兒主要分布在肩胛間區(qū)、腋窩及頸后部等處。棕色脂肪組織僅在嬰兒時(shí)期發(fā)揮作用，它們堆積在新生兒肩胛處，幫助維持體溫。隨著年齡增長(zhǎng)，棕色脂肪會(huì)逐漸消失。終，動(dòng)物體內(nèi)只殘存少量棕色脂肪細(xì)胞，分布于頸部和鎖骨。脂肪干細(xì)胞（ADSCs）是一種具有多向分化潛能的干細(xì)胞，主要恢復(fù)組織細(xì)胞的修復(fù)功能，促進(jìn)細(xì)胞的再生，恢復(fù)年輕面容的同時(shí)，身體機(jī)能也得到充分改善，有效改善亞健康、早衰等疾病，由內(nèi)而外真正的有效抵抗衰老。脂肪干細(xì)胞具有很多優(yōu)點(diǎn)：①具有自我更新及多向分化的潛能；②來(lái)源充足；③對(duì)供區(qū)的創(chuàng)傷較?。虎塬@得率及體外擴(kuò)增速率高。脂肪干細(xì)胞是目前被廣泛應(yīng)用于組織工程領(lǐng)域中理想的種子細(xì)胞。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠棕色脂肪干采用膠原酶消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠棕色脂肪干經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以?xún)?nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞復(fù)蘇步驟:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠甘肽/甘素(GAL)試劑盒 ，英文名： GAL ELISA Kit

Porcine thyroopin releasing hormone (H) ELISA Kit 豬促甲狀腺素釋放激素(H)試劑盒

轉(zhuǎn)基因植物NOS基因核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>) 48T

CLIAKitforMCP-4/CCL13(Humanmonocytechemotacticprotein4)ELISAkit人單核細(xì)胞趨化蛋白4

體液唾液酸(SA)比色法定量試劑盒50次

ELISAKitIL-1β綿羊白介素1β

血栓素A2   英文名稱(chēng)：   Human Thromboxane A2   英文縮寫(xiě)：   TXA2

血栓素B2   英文名稱(chēng)：   Human Thromboxane B2   英文縮寫(xiě)：   TXB2

血栓素B2   英文名稱(chēng)：   Human Thromboxanes B2   英文縮寫(xiě)：   TXB2

甲狀腺球蛋白抗體   英文名稱(chēng)：   Human Thyroglobulin Aibody   英文縮寫(xiě)：   TGAb

FLJ37424蛋白抗體

小鼠脂肪甘油三酯酯酶(ATGL)試劑盒 96T/48T

Human ai hepatitis B virus core aibody IgM (HBcAb-IgM) ELISA Kit 人抗乙型肝病毒核心IgM抗體(HBcAb-IgM)試劑盒

Humanneuophilicalkalinephosphatase,NAPELISAKit 人中性粒細(xì)胞堿性0酸酶(NAP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAACT(HumanAlpha1Aichymoypsin)ELISAKit人α1抗胰

抗原修復(fù)溶液50毫升

MouseNeuroophin3,-3ELISAKit小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(-3)試劑盒規(guī)格：96T/48T

Bruton酪激酶抑制劑蛋白抗體

EPHA4重組小鼠 EphA4 / HEK8 蛋白 Protein

Apelin receptor/APJ receptor Apelin receptor抗原 0.5mgApelin receptor/APJ receptor Apelin receptor抗原

MFGE8重組人 MFG-E8 / lactadherin / MFGE8 蛋白 Protein

CCL15 Protein Human 重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113， His 標(biāo)簽)

CD70 Protein Rat 重組大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

大鼠棕色脂肪干細(xì)胞白介素2(IL2)重組蛋白 Recombinant Interleukin 2 (IL2)

CCL15 Protein Human 重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113， His 標(biāo)簽)

XCL1重組小鼠 XCL1 蛋白 Protein

IL2RA Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL2RA 蛋白

CKB重組人 CKB / Creatine kinase B type 蛋白 Protein

細(xì)胞凍存步驟:

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。