腸桿菌科的檢驗方法
腸桿菌科作為食品衛(wèi)生指標(biāo)菌在歐洲已有多年歷史，對其檢驗方法不少學(xué)者曾進(jìn)行了研究。目前北歐食品分析委員會（NMKL）及ISO已制定了食品中腸桿菌科檢驗的標(biāo)準(zhǔn)方法。包括了直接增菌和前增菌的定性方法；菌落計數(shù)和帶恢復(fù)的MPN定量方法。近年來，隨著對外貿(mào)易的發(fā)展，歐洲一些國家已對我國出口的某些食品和動物飼料提出了檢測和*。且將其作為間食品微生物學(xué)實驗室質(zhì)量控制、水平測試的必測項目之一。我國大多數(shù)食品衛(wèi)生檢驗人員對該項指標(biāo)和檢驗方法缺乏了解，為適應(yīng)外貿(mào)發(fā)展需要，原天津、遼寧商檢局的技術(shù)人員，采用標(biāo)準(zhǔn)菌株和自然食品樣品參照國外現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行了研究，制定了《出口食品中腸桿菌科檢驗方法》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。該行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有如下特點：
1、制定了兩種定量檢驗方法，可根據(jù)對各種食品規(guī)定的不同*或加工方式進(jìn)行選擇。菌落計數(shù)法適用于檢查未經(jīng)加工處理的生鮮食品或腸桿菌科計數(shù)*>100/g的加工食品，帶恢復(fù)的MPN法適用于腸桿菌科計數(shù)≤100/g的加工食品。
2、采用了亞致死性損傷菌恢復(fù)步驟并成功地應(yīng)用于MPN定量法中，對冷凍產(chǎn)品，加熱冷凍產(chǎn)品采用36±1℃4h恢復(fù)，對加熱干燥等處理過的食品需用36±1℃18－24h恢復(fù)。
3、將國外現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)方法中EE肉湯作了改良，即將原配方中的膽汁含量由20g/L降至10g/L。大大降低了對腸桿菌科細(xì)菌的抑制力，提高了方法的靈敏度和檢出率。
4、對在分離培養(yǎng)基VRBGA上經(jīng)36±1℃培養(yǎng)24h后，菌落直徑仍<0.5mm的腸桿菌科。如奇異變形桿菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌等延長培養(yǎng)時間至48h，彌補了國外現(xiàn)有方法中僅在VRBGA 36±1℃培養(yǎng)24h后，挑選菌落直徑>0.5mm的腸桿菌科菌落可造成漏檢之不足。
5、NMKL法僅以氧化酶陰性、ISO方法以氧化酶陰性和葡萄糖瓊脂呈黃色為陽性對腸桿菌科進(jìn)行確認(rèn)。前法可將不發(fā)酵葡萄糖，但可利用蛋白胨生長、氧化酶也為陰性的沃夫氏不動桿菌誤判為腸桿菌科，造成假陽性結(jié)果，使計數(shù)結(jié)果偏高；后法則易將葡萄糖瓊脂表面變?yōu)樗{(lán)色的陰溝腸桿菌，產(chǎn)氣腸桿菌和沙雷氏菌漏檢，出現(xiàn)假陰性，使計數(shù)結(jié)果偏低。本行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)采用了氧化酶陰性，葡萄糖瓊脂發(fā)酵為全黃或黃色底層、藍(lán)色斜面，產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣作為判定標(biāo)準(zhǔn)才可對腸桿菌科進(jìn)行準(zhǔn)確的確認(rèn)。
6、方法的靈敏度
（1）菌落計數(shù)法的靈敏度為≥10/g
（2）帶恢復(fù)的MPN法的靈敏度為≤10/g或<100/g
