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閱讀:3717發(fā)布時(shí)間:2012-3-27
*的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)*的作用反應(yīng)不一樣。*分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān),在 pH 為 8.0 、溫度為 37℃ 時(shí),*溶液的作用能力zui強(qiáng)。使用*時(shí),應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間,以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。因 Ca2+ 、 Mg2+ 和血清、蛋白質(zhì)克降低*的活性,所以配制*溶液時(shí)應(yīng)選用不含 Ca2+ 、 Mg2+ 的 BSS ,如: D-Hanks 液。終止消化時(shí),可用含有血清培養(yǎng)液或者*抑制劑終止*對(duì)細(xì)胞的作用。
1. 稱取*:按*液濃度為 0.25 %,用電子天平準(zhǔn)確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水(若用雙蒸水需要調(diào) PH 到 7.2 左右)或 PBS ( D-hanks )液中。攪拌混勻,置于 4℃ 內(nèi)過(guò)夜。
2. 用注射濾器抽濾消毒:配好的*溶液要在超凈臺(tái)內(nèi)用注射濾器( 0.22 微米微孔濾膜)抽濾除菌。然后分裝成小瓶于 -20℃ 保存以備使用。
*能夠催化蛋白質(zhì)的特定肽鍵水解,這個(gè)催化過(guò)程是不需要能量的,不會(huì)使酶失去活力,也不會(huì)改變形狀和使自身水解。底物與酶的活性中心的結(jié)合是可逆的,這種結(jié)合使得蛋白質(zhì)特定肽鍵因彎曲變形而被活化,更易于受到水分子的攻擊,分別形成氨基和羧基而斷裂,得到小分子多肽或氨基酸。不同的蛋白酶可以作用在不同氨基酸相連組成的肽鍵,因此*并不能作用在所有的肽鍵。
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