多環(huán)芳烴（polcyclicaromatichydrocarbons，PAHs）是環(huán)境中分布極為廣泛的有機(jī)污染物，存在于空氣、水、土壤、沉積物、食品、生物體等各種環(huán)境介質(zhì)中，具有生物難降解特性，是一類(lèi)持久性有機(jī)污染物[1]。PAHs具有明顯的致癌、致畸和致突變作用，與多種癌癥的發(fā)生有關(guān)，是一類(lèi)威脅人類(lèi)健康的主要環(huán)境污染物[2]。已有研究表明，食品和水是人類(lèi)受多環(huán)芳烴污染的主要途徑[3]，食品中產(chǎn)生多環(huán)芳烴的途徑包括環(huán)境污染、加工過(guò)程和包裝等。對(duì)食用植物油而言，多環(huán)芳烴可在油籽干燥過(guò)程中與燃燒不*或熱解燃?xì)庵苯咏佑|而產(chǎn)生，也有可能在收獲、運(yùn)輸、加工等過(guò)程中因接觸機(jī)油等而受到多環(huán)芳烴污染，在某些地區(qū)，農(nóng)民將大豆等食用油原料晾曬在瀝青路面上，這也有可能殘留多環(huán)芳烴[4]。Pandey等在2004年對(duì)296個(gè)食用植物油樣品多環(huán)芳烴的檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，88.5%的樣品存在多環(huán)芳烴污染[5]。
針對(duì)食用植物油中有可能普遍存在的多環(huán)芳烴污染，世界各國(guó)均制定了嚴(yán)格的*。我國(guó)在GB2762—2012中規(guī)定苯并（a）芘（多環(huán)芳烴的代表性物質(zhì)）的高殘留*為10μg/kg[6]；歐盟委員會(huì)法令（EC）NO835—2011規(guī)定可食用油、脂肪（不包括可可油和椰子油）中苯并（a）芘的高殘留*為2μg/kg，且苯并（a）芘、蒽、熒蒽、屈4種多環(huán)芳烴總*值≤10μg/kg；韓國(guó)規(guī)定植物油中苯并（a）芘的高殘留*為2μg/kg；西班牙規(guī)定重PAH（5～6環(huán)）總量的*為5μg/kg，其中，每種的*為2μg/kg[7]。上對(duì)食用油中多環(huán)芳烴的檢測(cè)方法也提出了很高的要求。我國(guó)《食品中苯并（a）芘的測(cè)定》（GB/T5009.27—2003）采用熒光分光光度計(jì)法和目測(cè)比色法[8]，但只能監(jiān)控食品中的一種多環(huán)芳烴，且效果較差；《動(dòng)植物油脂多環(huán)芳烴的測(cè)定》（GB/T24893—2010）采用固相萃取法[9]，但整個(gè)過(guò)程耗時(shí)較長(zhǎng)。張志偉等報(bào)道利用供體受體復(fù)合色譜法測(cè)定植物油中16種歐盟優(yōu)控多環(huán)芳烴[4，10]，但該方法需要用到DAAC凈化，不易推廣。本試驗(yàn)針對(duì)植物油中16種美國(guó)（EPA）優(yōu)控多環(huán)芳烴，進(jìn)行凝膠滲透色譜（GPC）凈化和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）測(cè)定方法研究，以期為食用植物油中多環(huán)芳烴的檢測(cè)提供有益參考。
1材料與方法
1.1材料
食用植物油樣品購(gòu)自南京蘇果超市。
1.2試劑
環(huán)己烷、正己烷、乙酸乙酯均為色譜純，購(gòu)自美國(guó)TEDIA公司；萘、苊、二氫苊、芴、菲、蒽、熒蒽、芘、屈、苯并（a）蒽、苯并（k）熒蒽、苯并（b）熒蒽、苯并（a）芘、二苯并（a，h）蒽、茚并（1，2，3-cd）芘、苯并（g，h，i）芘，共16種多環(huán)芳烴混合標(biāo)準(zhǔn)品，美國(guó)Accustandard公司生產(chǎn)，每種物質(zhì)均為100μg/mL甲醇溶液，于-4℃條件下避光保存。
1.3儀器設(shè)備
XS205Dualrnge電子分析天平，瑞士MettlerToledo生產(chǎn)；FreeStyleTM凝膠滲透色譜儀（含GPC、EVA模塊）和300mm×25mm凝膠滲透色譜柱（填料為BioBeadsS-X350g），德國(guó)LCTech生產(chǎn)；7890A-5975C氣質(zhì)聯(lián)用儀、30m×250μm×0.25μm氣相色譜柱HP-5MSUI，美國(guó)Agilenttechnologies生產(chǎn)。
1.4測(cè)定方法
1.4.1空白植物油的制備參考張志偉方法[4]，稱(chēng)取大豆油約40g于圓底燒瓶中，加入2g活性炭，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中90℃加熱2h，取出3000r/min離心5min，上清液過(guò)0.45μm濾膜除去雜質(zhì)，經(jīng)檢測(cè)無(wú)多環(huán)芳烴峰后備用。
1.4.2樣品提取與凈化稱(chēng)取1.00g植物油樣品，加入10mL比例為1∶1的乙酸乙酯和環(huán)己烷，渦旋均質(zhì)，待GPC凈化。GPC流動(dòng)相為1∶1的乙酸乙酯和環(huán)己烷，流動(dòng)相流速5mL/min，上樣量為5mL。棄去初24min的收集液，收集24～32min的流出液在線濃縮至近干，正己烷定容至1mL，待進(jìn)氣質(zhì)聯(lián)用儀分析。
1.4.3色譜、質(zhì)譜條件色譜條件：載氣為純度>99.9999%的He，流速為1min/L，進(jìn)樣口溫度為280℃，進(jìn)樣量為1μL，脈沖不分流模式進(jìn)樣，30m×0.25mm×0.25μmHP-5MS色譜柱。程序升溫模式：40℃1min；以10℃/min升至200℃，維持2min；以10℃/min升至300℃。
質(zhì)譜條件：傳輸線溫度為300℃、EI源溫度為230℃、四級(jí)桿溫度為150℃、電離能量70eV、溶劑延遲為6min。全掃描（SCAN，m/z100-450）模式用于試驗(yàn)條件優(yōu)化，選擇離子檢測(cè)（SIM）模式用于定性、定量分析。
2結(jié)果與分析
2.1進(jìn)樣條件優(yōu)化
分別選擇脈沖不分流模式和不分流模式進(jìn)樣，比較進(jìn)樣口溫度為260、280、300℃時(shí)100ng/mL16種多環(huán)芳烴標(biāo)樣的總響應(yīng)值。由圖1可見(jiàn)，脈沖不分流模式下多環(huán)芳烴的總響應(yīng)值是不分流模式的2倍；進(jìn)樣口溫度為280℃時(shí)，16種多環(huán)芳烴標(biāo)樣的總響應(yīng)值高。2.2SIM模式參數(shù)設(shè)置
通過(guò)SCAN模式獲得總離子流圖，根據(jù)保留時(shí)間和碎片離子將化合物分為8組（表1）。由于多環(huán)芳烴類(lèi)化合物結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，其特征離子多數(shù)為分子離子及其同位素離子。
2.3GPC凈化條件的建立與優(yōu)化
采用分段收集建立GPC凈化方法：將標(biāo)樣注入GPC，流動(dòng)相以5mL/min流速?zèng)_洗，棄去初10min的沖洗液，10～50min之間每2min收集1次，約10mL，搖勻后進(jìn)氣質(zhì)聯(lián)用儀分析，計(jì)算各多環(huán)芳烴累計(jì)回收率。以萘為例，由圖2可見(jiàn)，在第24～26min，萘開(kāi)始從GPC分離柱中流出，至30min達(dá)到95.1%，后基本無(wú)流出。因此，綜合考慮16種多環(huán)芳烴的流出曲線，確定本試驗(yàn)GPC的收集條件為：自24min開(kāi)始收集流出液，直至30min，此時(shí)，脂肪等大分子物質(zhì)和16種多環(huán)芳烴可以得到很好的分離。
2.4氣質(zhì)聯(lián)用法參數(shù)測(cè)定
以各多環(huán)芳烴物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與對(duì)應(yīng)的響應(yīng)面面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定線性范圍，計(jì)算線性方程及線性相關(guān)系數(shù)；以3倍信號(hào)噪音比計(jì)算測(cè)定方法的檢出限（LOD），以10倍信號(hào)噪音比計(jì)算測(cè)定方法的定量限（LOQ）；對(duì)多環(huán)芳烴空白植物油添加1μg/mL多環(huán)芳烴混標(biāo)液1mL，即加標(biāo)量為1μg，進(jìn)行6次獨(dú)立測(cè)定，求得平均加標(biāo)回收率（R）及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。由表2可見(jiàn)，16種多環(huán)芳烴在0.5～50μg/kg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r2值均在0.9970以上；16種多環(huán)芳烴的檢出限范圍0.07～0.2μg/kg，定量限達(dá)到0.2～0.5μg/kg；平均加標(biāo)回收率為80%～101%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍為1.2%～9.9%。氣質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定的參數(shù)均滿(mǎn)足GB/T27404要求，可以用于食用植物油中多環(huán)芳烴的檢測(cè)。
食品基質(zhì)中多環(huán)芳烴的凈化，目前流行的是固相萃取。對(duì)植物油而言，在提取過(guò)程中由于多環(huán)芳烴含量多數(shù)為痕量級(jí)，且具有脂溶性特征，因此，基質(zhì)中的脂肪通常會(huì)與多環(huán)芳烴共同被提取出來(lái)，成為主要的檢測(cè)干擾物質(zhì)。凝膠滲透色譜通過(guò)脂肪分子和多環(huán)芳烴分子量的差異而分離，本試驗(yàn)凈化方法可以有效去除脂肪分子，同時(shí)可保留90%以上的待測(cè)物質(zhì)多環(huán)芳烴。
對(duì)于多環(huán)芳烴的檢測(cè)，常見(jiàn)的是液相色譜熒光法（HPLC-FLD）和氣質(zhì)聯(lián)用法（GC-MS）。HPLC-FLD的好處在于方法簡(jiǎn)便，不需要高值儀器，對(duì)能發(fā)射熒光的多環(huán)芳烴有較好的選擇性和靈敏度。和HPLC-FLD相比，GC-MS法優(yōu)勢(shì)在于GC可以提供比HPLC更高的分離能力，MS可以提供更好的選擇性，同時(shí)還可以給出待測(cè)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息。對(duì)于不能激發(fā)或只能激發(fā)較弱熒光的多環(huán)芳烴如萘、苊、二氫苊、芴等，檢測(cè)只能依賴(lài)于GC-MS方法。
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