一、801-D（人巨細(xì)胞性肺癌細(xì)胞）詳情
種屬人年齡（性別）
組織來源
生長特性貼壁
細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣
背景描述801-D細(xì)胞是人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移株；據(jù)報(bào)道，801-D細(xì)胞具有高表達(dá)的端粒酶活性，可用于肺癌的基礎(chǔ)和臨床研究。
生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S
培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃
二、細(xì)胞接收后的處理：
1、貼壁細(xì)胞
收到T25方瓶細(xì)胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們（凍存管細(xì)胞收到后直接37℃水浴復(fù)蘇或直接放置于液氮中長期儲存）。
請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，換用新鮮的完quan 培養(yǎng)基。
如果細(xì)胞長滿（90%以上）請及時進(jìn)行細(xì)胞傳代。
接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
2、懸浮細(xì)胞
收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將15ml離心管置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
1200rpm離心5min，棄去15ml離心管中的培養(yǎng)基，細(xì)胞沉淀用新鮮的完quan培養(yǎng)基重懸并培養(yǎng)。
如果細(xì)胞長滿（90%以上）請及時進(jìn)行細(xì)胞傳代。
接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-3分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1200RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，先要消化處理并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3步驟進(jìn)行，最后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計(jì)數(shù)后離心，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。
注意事項(xiàng)：
1.收到凍存管細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
3.細(xì)胞用途：僅供科研使用。
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