近紅外熒光蛋白標(biāo)記乳-腺細(xì)胞外泌體的構(gòu)建及鑒定

齊岳生物提供一系列外泌體分離產(chǎn)品和工具，用于表征和分析其RNA和含量，以及體外和體內(nèi)追蹤，以幫助您進(jìn)一步了解這些迷人的外泌體。外泌體是包含了復(fù)雜RNA和的小膜泡 (30–150nm)，由體外和體內(nèi)細(xì)胞持續(xù)分泌。由于人體內(nèi)復(fù)雜的功能，包括細(xì)胞間通訊和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，外泌體正在改變研究。這些細(xì)胞外囊泡正在生長，這既是為了了解其生物學(xué)功能，也是為了將其用于實際應(yīng)用，如無創(chuàng)診斷和研究。

外泌體具有磷脂雙分子膜結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致其沉降系數(shù)和聚集體有著很大的不同。而且外泌體膜表面存在性膜蛋白如CD9和CD81，前者被和遷移有關(guān)，后者與丙型肝炎的侵染有關(guān)。而因為外泌體具有這些的易分離的特點，我們可以通過密度梯度離心，親和層析等方法對外泌體進(jìn)行分離和純化。

近紅外熒光蛋白標(biāo)記乳-腺細(xì)胞外泌體的構(gòu)建及鑒定

    （摘） 外泌體(Exosomes)是一種大小為30~100 nm的細(xì)胞外膜囊泡,與細(xì)胞的生物學(xué)功能及細(xì)胞間的信號傳遞有著密切的關(guān)系,在癥的診斷及等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。為將外泌體地應(yīng)用于乳-腺傳遞機制的研究,

   先通過分子克隆手段將近紅外熒光蛋白iRFP682基因和外泌體標(biāo)記蛋白CD63基因克隆到含腺相關(guān)(Adeno-associated virus,AAV)末端倒置重復(fù)序列(Inverted repeat terminal,ITR)的質(zhì)粒載體上,構(gòu)建融合表達(dá)近紅外熒光蛋白和CD63蛋白的重組真核表達(dá)載體。然后再與輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染AAV-293細(xì)胞,包裝重組腺相關(guān)、純化測量滴度后用于乳-腺細(xì)胞,通過熒光篩選出穩(wěn)定表達(dá)近紅外熒光蛋白的乳-腺細(xì)胞株。通過對乳-腺穩(wěn)定株的分離、純化及鑒定,得到一個生物標(biāo)記物：iRFP682標(biāo)記的乳-腺細(xì)胞來源的外泌體,為后續(xù)研究外泌體在乳-腺微環(huán)境中的分布及信號傳遞提供保障。

應(yīng)用：

外泌體在正常體環(huán)境和發(fā)病機制中的作用

    外泌體可以被認(rèn)為是生物反應(yīng)過程中的重要信號體。例如，外泌體可以應(yīng)答或，從而參與監(jiān)視。在血液循環(huán)中，外泌體通過提供用于組裝凝血因子的場所而參與血凝反應(yīng)。在大腦中，元可以通過外泌體的分泌進(jìn)行交流，這有助于近端和遠(yuǎn)端突觸的可塑性。外泌體也參與干細(xì)胞維持和可塑性，并且由于它們的抗細(xì)胞凋亡和性質(zhì)，它們似乎在受損的修復(fù)中具有重要作用。通過使用外泌體作為劑，可以將這些作用轉(zhuǎn)化為。此外，外泌體大多數(shù)細(xì)胞都可分泌，含有RNA并且能夠?qū)⑵鋬?nèi)容物轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞的，這表明它們將是適合科研遞送的候選物，是性核酸遞送。外泌體的相同性質(zhì)強調(diào)了它們在維持正常生理學(xué)中的重要作用，可使它們參與病理反應(yīng)。例如，外泌體可通過誘導(dǎo)不需要的耐受，傳遞致基因（例如MET），核酸轉(zhuǎn)移來支持生長和相關(guān)病理。在出現(xiàn)的情況下，外泌體可以誘導(dǎo)針對自身抗原的應(yīng)答。外泌體介導(dǎo)的朊蛋白轉(zhuǎn)運也可以推進(jìn)退行性的進(jìn)展;此外，HIV-1也與外囊泡結(jié)合進(jìn)行轉(zhuǎn)移有關(guān)。由于它們參與，外泌體被認(rèn)為是進(jìn)行的靶標(biāo)。

產(chǎn)品供應(yīng)：

上述產(chǎn)品齊岳實驗室均可提供！

wyf 01.08