大家在養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候，想必大家也一定遇到過細(xì)胞狀態(tài)差這種情況，但是細(xì)胞狀態(tài)差，有很多種原因造成。細(xì)胞狀態(tài)很差，常常出現(xiàn)的現(xiàn)象是：細(xì)胞邊緣不清晰、細(xì)胞不飽滿、折光性差、背景比較臟、黑點(diǎn)很多、細(xì)胞碎片多（細(xì)胞凋亡后的細(xì)胞碎片）、單個(gè)細(xì)胞內(nèi)有空泡（凋亡）且空泡比較多；如果細(xì)胞出現(xiàn)老化，也就是細(xì)胞比較扁平、增殖減緩、細(xì)胞核體積增大、細(xì)胞突觸變多，此時(shí)觀察到的細(xì)胞狀態(tài)也是不正常的。所以，除了考慮血清和細(xì)菌污染的問題，細(xì)胞老化也不容忽視~

細(xì)胞老化的征兆：

一、細(xì)胞周期阻滯

長期的細(xì)胞周期阻滯是老化細(xì)胞的基本特征，也是體外鑒定細(xì)胞老化的指標(biāo)。為了檢查細(xì)胞是否躍出了細(xì)胞周期，人們通常檢測增殖指示分子Ki-67的表達(dá)豐度；或者通過將與胸腺嘧啶相似的溴脫氧尿mi啶（Bromodeoxyuridine，BrdU）摻入到細(xì)胞培養(yǎng)基中，觀察是否有新的DNA合成。細(xì)胞老化主要表現(xiàn)為G1期阻滯，個(gè)別情況下也可伴隨G2/M期周期阻滯，或直接由G2/M期阻滯誘發(fā)形成。

二、細(xì)胞形態(tài)改變

雖然由于細(xì)胞周期的中斷和DNA復(fù)制的停止，老化細(xì)胞內(nèi)的DNA含量與正常細(xì)胞類似，但 RNA與蛋白質(zhì)豐度均比正常細(xì)胞要明顯升高。這是因?yàn)椋M管細(xì)胞進(jìn)入老化階段后蛋白質(zhì)的整體合成速率降低，但是蛋白質(zhì)的降解體系受到更加明顯的抑制，導(dǎo)致蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)持續(xù)堆積。但，由于不同組織來源的細(xì)胞，其形態(tài)本就各不相同，因此，目前還并無客觀的、統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)從細(xì)胞形態(tài)判斷并定義老化細(xì)胞。換句話說，目前并不能直接根據(jù)細(xì)胞的形態(tài)去判斷是否老化細(xì)胞。

總結(jié)：

研究表明,衰老細(xì)胞的細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜等均有明顯的變化：

①細(xì)胞內(nèi)水分減少,體積變小,新陳代謝速度減慢；

②細(xì)胞內(nèi)酶的活性降低；

③細(xì)胞內(nèi)的色素會積累；

④細(xì)胞內(nèi)呼吸速度減慢,細(xì)胞核體積增大,核膜內(nèi)折,染色質(zhì)收縮,顏色加深.線粒體數(shù)量減少,體積增大；

⑤細(xì)胞膜通透性功能改變,使物質(zhì)運(yùn)輸功能降低.

如何防止細(xì)胞老化：

1. 不要等細(xì)胞長得太滿才傳代。細(xì)胞太密會導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)下降，產(chǎn)生細(xì)胞接觸性抑制。

2. 細(xì)胞不要消化過度。采用醫(yī)蛋白酶消化細(xì)胞，會造成細(xì)胞表面一定程度的細(xì)胞損傷。

3. 最重要的是使用優(yōu)質(zhì)的血清和培養(yǎng)基：干細(xì)胞對培養(yǎng)基中的內(nèi)毒素非常敏感。除了要留意基礎(chǔ)培養(yǎng)基的內(nèi)毒素外，也要留意血清的內(nèi)毒素。如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時(shí)，干細(xì)胞很容易老化或死亡，導(dǎo)致細(xì)胞“亞健康"狀態(tài)，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)受到影響。很多使用者，在血清在試用前，就會通過提早審核該批次《檢測報(bào)告》，以決定是否入圍進(jìn)行試用。

4. 在開始養(yǎng)細(xì)胞并傳代時(shí)，也要特別注意凍存細(xì)胞，以保持細(xì)胞有種子庫存在，可以有效避免細(xì)胞損傷。