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目前，分子生物學(xué)正在并終肯定會讓我們對整個(gè)生命科學(xué)有一個(gè)全面而*的認(rèn)識，其對免疫測定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的，它使我們對以前一些難以檢測的生物活性物質(zhì)的測定變得輕而易舉，并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。

較早用于免疫測定的基因工程抗原是HBcAg和HBsAg，這兩種基因工程抗原的出現(xiàn)，較好地解決了抗HBc和HBe的測定問題。因?yàn)橐獜牟《颈旧砣ゴ罅揩@取這兩種純抗原較為困難，并且這一點(diǎn)對于難培養(yǎng)的病原微生物來說，如HIV、HCV和梅毒螺旋體等都有些共性。

 一、ELISA 

  HCV目前尚不能體外培養(yǎng)，只能用基因工程或化學(xué)合成方法獲取HCV結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)區(qū)的各種抗原片斷，已知HCV基因組有7個(gè)功能區(qū)組成：核心、E1、E2/NS1 NS2 NS3 NS4 NS5（有分為NS5a和NS5b）區(qū)，合成抗原的優(yōu)點(diǎn)是易于純化，特異性好，抗原抗體反應(yīng)強(qiáng)。

二、代抗HCV-ELISA

由美國ortho公司克隆C1003抗原幾個(gè)片斷與人超氧化物歧化酶（SOD）結(jié)合。用酵母從病毒基因組非結(jié)合區(qū)得到表達(dá)，表達(dá)為融合蛋白，亦作為包被固相載體。

抗原組合：NS4 區(qū)二個(gè)基因片斷為NS 5-1-1和C1003

特性：IgG抗C100在發(fā)病后數(shù)月后，才檢出，故不宜作早期診斷。

約由20%的病人不出現(xiàn)抗體。IgM抗-C100急性期檢出率只有64%。

C100的抗原性較弱，在HCV復(fù)制中，不能充分暴露宿主的免疫系統(tǒng)。

特異性和靈敏性較差。

三、第二代HCV-ELISA試劑盒

 用基因重組的HCV結(jié)構(gòu)蛋白與非結(jié)構(gòu)蛋白抗原包被固相載體。

抗原組合：核心區(qū)（C區(qū)）多肽C22  NS區(qū)多肽C33  C1003和NS 5-1-1

增加C22區(qū)和C33區(qū)后，抗體出現(xiàn)早，有助早期診斷，提高陽性率。有利早期診斷。

C22是早期易出現(xiàn)病毒血癥

四、第四代HCV-ELISA 試劑盒

美國新近推出一種包括HCV基因組7個(gè)功能區(qū)所有免疫決定基的單一融合蛋白，稱為多決定基融合抗原，采用表面活性劑處理分界病毒表面復(fù)合物，釋放HCV核心抗原      （core）并用ELISA法，靈敏度可達(dá)500拷貝/ml，已接近核酸擴(kuò)增檢測水平。

 抗原組合：以Core和NS3作為主要檢測片斷（比例十分重要）加合成多肽NS4

 特點(diǎn)：

① 直接測Core抗原；

②不易發(fā)生變異；

③ 抗IgM 和IgG檢出率可達(dá)100%；

④ 特異性達(dá)99。8%靈敏度為100%。

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