（一）污染清除方法

培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。如果污染細(xì)胞價(jià)值不大，宜棄之；在尋找原因后*消毒操作室，復(fù)蘇或重新購(gòu)置細(xì)胞，再培養(yǎng)。  

污染細(xì)胞價(jià)值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除。

1. 細(xì)菌和真菌的清除

抗生素對(duì)殺滅細(xì)菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。  

預(yù)防用藥一般用雙抗生素，污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時(shí)，再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期有效。

2. 支原體的清除

(1)  用MRA處理

用MRA（Mycoplasma Removal Agent）處理細(xì)胞，每4天換一次液,連續(xù)處理15天以確保細(xì)胞純潔健康，效果好。   

(2)  用清洗純化法清除支原體污染的方法

細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)馴化→細(xì)胞群的篩選→細(xì)胞清洗→反復(fù)離心洗滌。

其原理是利用離心力、細(xì)胞、微生物質(zhì)量和懸液的浮力差達(dá)到清除支原體的目的。由于支原體個(gè)體小且除發(fā)酵支原體外多為細(xì)胞外寄生,所以通過反復(fù)洗滌細(xì)胞和低速離心換液使其中潛在的支原體數(shù)量降低限.

如結(jié)合敏感抗生素的抑殺作用，可達(dá)到更好的效果。

(3)  藥物輔助加溫處理

先用藥物處理后，再將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時(shí)，可殺死支原體，但對(duì)細(xì)胞有不良影響。

(4)  使用支原體特異性血清  

用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長(zhǎng)，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性，并且5個(gè)月后仍為陰性。

但此法比較麻煩，不如用抗生素方便、經(jīng)濟(jì)。   

（二）污染的預(yù)防

預(yù)防是防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的辦法。只有預(yù)防工作做在前，才能將發(fā)生污染的可能性降到小程度。  

 一般預(yù)防可從以下幾方面著手：

1、添加抗生素

2、從物品、用品消毒滅菌著手

細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔細(xì)，并在無菌試驗(yàn)陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。   

3、從操作者做起

(1)  進(jìn)無菌室前要用肥皂洗手，按規(guī)定穿隔離衣。工作開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。

(2)  操作者動(dòng)作要輕，必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口，并將瓶口轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼。操作時(shí)盡量不要談話，若打噴嚏或咳嗽應(yīng)轉(zhuǎn)向背面。

(3)  操作時(shí)要常更換吸管，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去。實(shí)驗(yàn)完畢用消毒水浸泡的紗布擦臺(tái)面。

4、防止細(xì)胞交叉污染

(1)  在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)，所用器具要嚴(yán)格區(qū)分。 

(2)  在進(jìn)行換液或傳代操作時(shí)，注射器和滴管不要觸及細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶口，以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞。   '

(3)  細(xì)胞一旦購(gòu)置或從別處引入，均應(yīng)及早留種凍存，一旦發(fā)生污染可重新復(fù)蘇培養(yǎng)。

5、無菌室的*消毒 

(1)  0.1%新潔爾滅全面*擦洗無菌室；

(2)  甲醛熏蒸法：甲醛是一種廣譜滅菌劑菌，其水溶液和氣休對(duì)各種細(xì)菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。

(3)  細(xì)胞培養(yǎng)，首先要避免污染，但在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，有了污染用適當(dāng)?shù)姆椒ㄇ宄?，這樣也可以保證細(xì)胞培養(yǎng)的成功。