智慧城市網(wǎng)
技術(shù)文章
Biolog方法用于環(huán)境微生物群落研究
閱讀：187 發(fā)布時(shí)間：2023-7-13Biolog方法美國(guó)的BIOLOG公司于1989年開發(fā)成功，最初就根據(jù)其中具體類型的代謝指紋來(lái)鑒定已分離純化的環(huán)境微生物物種，至今已經(jīng)能夠鑒定包括細(xì)菌、酵母菌和霉菌在內(nèi)的2000多種病原微生物和環(huán)境微生物。1991年，Garland和Mills開始將這種方法應(yīng)用于土壤微生物群落的研究，該項(xiàng)工作引起了許多微生物生態(tài)學(xué)研究者的廣泛關(guān)注。測(cè)定原理：Biolog研究環(huán)境微生物的載體是微孔板(micro plate)，每板包含96個(gè)孔，其中95個(gè)孔中加入了95種單一碳源和四唑染料，另外一個(gè)未加碳源的孔中加水為對(duì)照，環(huán)境微生物接種到微孔板上的孔中后，孔中的環(huán)境微生物就可能利用其中的碳源而發(fā)生氧化還原作用，而孔中一旦有電子轉(zhuǎn)移，這種四唑染料就會(huì)變?yōu)樽仙?，同時(shí)也表明這種碳源被接種到其中的環(huán)境微生物所利用。顏色的深淺可以反映環(huán)境微生物對(duì)碳源的利用程度。由于環(huán)境微生物對(duì)不同碳源的利用能力很大程度上取決于環(huán)境微生物的種類和固有性質(zhì)，因此在一塊微平板上同時(shí)測(cè)定環(huán)境微生物對(duì)不同單一碳源的利用能力(sole carbon source utilization，SCSU)，就可以鑒定純種環(huán)境微生物或比較分析不同的環(huán)境微生物群落。
Biolog方法用于環(huán)境微生物群落研究，具有以下特點(diǎn)：①靈敏度高，分辨力強(qiáng)，對(duì)SCSU的測(cè)定可以得到被測(cè)環(huán)境微生物群落的代謝特征指紋(metabolic finger print)，分辨環(huán)境微生物群落的微小變化；②無(wú)需分離培養(yǎng)純種環(huán)境微生物，可最大限度地保留環(huán)境微生物群落原有的代謝特征；③測(cè)定簡(jiǎn)便，數(shù)據(jù)的讀取與記錄可以由計(jì)算機(jī)輔助完成，環(huán)境微生物對(duì)不同碳源代謝能力的測(cè)定在一塊微平板上一次完成，效率大大提高。
Biolog 系統(tǒng)主要包括Biolog微平板、微平板讀數(shù)器和一套微機(jī)系統(tǒng)，具體說明如下：
Biolog系統(tǒng)組成與說明：
Biolog微平板——共96孔，孔中含有營(yíng)養(yǎng)液和四唑鹽染料TTC；其中1孔不含碳源，為對(duì)照孔，其他95孔含有不同單一碳源；
讀數(shù)器——測(cè)定一定波長(zhǎng)下每個(gè)小孔內(nèi)的吸光度及變化；
微機(jī)系統(tǒng)——與讀數(shù)器相連，自動(dòng)完成數(shù)據(jù)采集、傳輸、貯存與分析。
Biolog方法操作的主要流程：
步驟1，平板選擇：針對(duì)G+和G-細(xì)菌選擇不同平板（Biolog GP、Biolog GN），各孔內(nèi)碳源也可調(diào)控；
步驟2，樣品制備：將微生物從環(huán)境介質(zhì)中提取出來(lái)，控制到適宜濃度（濁度表示）；
步驟3，加樣：取一定體積菌液（一般150μL/孔），平行加入各孔；
步驟4，培育與讀數(shù)：恒溫培育，用微平板讀數(shù)器記錄各孔吸光度值變化。