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生物體內基因排布與外在性狀表示的規(guī)律的技術
閱讀：87 發(fā)布時間：2023-7-12 對基因組進行PCR擴增，擴增產物通過瓊脂糖凝膠電泳或PA GE電泳檢測，研究DNA 多態(tài)性。由于隨機引fel較低的復性溫下能與基因組DM非特異性的結合，當相鄰兩個引物間的DNA 小于2000bp時，就能夠得到擴增產物。與RFLP相比，RA PD具有很多優(yōu)點。1不需要了解研究對象基因組的任何序列，只需很少純度不高的模板，就可以檢測出大量的信息。2無需專門設計RA W反應引物，隨機設計長度為8-10個堿基的核苷酸序列就可應用。3操作簡便，不涉及分子雜交、放射自顯影等技術。4需要很少的DNA 樣本。5不受環(huán)境、發(fā)育、數(shù)量性狀遺傳等的影響，能夠客觀地提示供試材料之間DNA 差別?？梢詸z測出RFLP標志不能檢測的重復順序區(qū)。當然RA PD技術有一定的局限性，呈顯性遺傳標記（極少數(shù)共顯性）不能有效區(qū)分雜合子和純合子。易受反應條件的影響，某些情況下，重復性較差，可靠性較低，對反應的微小變化十分敏感。如聚合酶的來源，DNA 不同提取方法，Mg2+離子濃度等都需要嚴格控制_隨機擴增多態(tài) DNA randomliamplifipolymorphDNA ,RA PD美國學者William和Welsh于1990年首先提出的該技術是通過分析DNA PCR產物的多態(tài)性來推測生物體內基因排布與外在性狀表示的規(guī)律的技術。RA PD技術是以8-lObp隨機寡核苷酸片段作為引物。
因而用一組人為設計的核苷酸作為引物，通過PCR隨機擴增可發(fā)生物種特異性的DNA 帶譜。根據(jù)隨機引物長度將這種技術分為AP-PCRarbitratiprimePCR,隨機擴增DNA 多態(tài)性分析(randomamplifipolymorphDNA RA PD一種建立基因組DNA 指紋圖譜多態(tài)性分析技術。其理論依據(jù)是不同的基因組中與隨意引物匹配的堿基序列的位點和數(shù)目可能不同。引物長度為020個堿基)RA PDrandornamplifipolymorphDNA 引物長度為10個堿基)和DA FDNA ampliffingerprint引物長度為510個堿基)三者獲得的DNA 指紋圖譜的復雜水平不同，引物越長，獲得的指紋圖譜越簡單。
隨機擴增多態(tài)性DNA標記（RandomamplificationpolymorphismDNA,簡稱RAPD標記）多個等位基因同時存在于一個基因座稱為遺傳多態(tài)性（genetic polymorphism）。
遺傳多態(tài)性一般是建立遺傳分子標記來分析的。主要有以下幾種方法：限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)標記：這種多態(tài)性是由于限制性內切酶酶切位點或位點間DNA區(qū)段發(fā)生突變引起的。隨機擴增多態(tài)性(RAPD)標記：RAPD是通過短的隨機引物擴增個體基因組DNA體現(xiàn)多態(tài)性 擴增片段長度(AFLP)多態(tài)性標記：AFLP是將PCR技術與RFLP結合的一種方法，通過對基因組DNA酶切片段的選擇性擴增來檢測DNA酶切片段長度的多態(tài)性。 微衛(wèi)星多態(tài)性標記(SSRP)：基于PCR技術的DNA標記，多態(tài)性是由同一座位上
的串聯(lián)單元數(shù)量的不同而產生的。 單鏈構象多態(tài)性標記(SSCP)單核苷酸多態(tài)性標記(SNP)：將被測DNA的片段與高密度DNA探針(中部單核苷酸替代探針)微陣列雜交，一次性快速顯示被測序列的單核苷酸多態(tài)性，并通過計算機分析雜交類型，最終顯示SNP結果。