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技術(shù)文章

國內(nèi)最早研究真菌毒素免疫檢測方法

閱讀:139          發(fā)布時間:2023-7-11


真菌毒素衛(wèi)生監(jiān)控的立法即國家標(biāo)準(zhǔn)的建立由兩方面組成:一是建立真菌毒素檢測方法的國家規(guī)范,主要為真菌毒素允許量國家標(biāo)準(zhǔn)的建立和衛(wèi)生防疫部門的執(zhí)法、糧油食品和飼料貿(mào)易的貨物品質(zhì)分析以及對引起真菌毒素中毒的污染物進行病因分析提供技術(shù)手段。二是建立食品和飼料中真菌毒素的允許量國家標(biāo)準(zhǔn)。這類規(guī)范屬于強制性執(zhí)行的法規(guī),制訂過程中除了依據(jù)毒理實驗的結(jié)果,還必需進行相當(dāng)規(guī)模的毒素污染調(diào)查,以確保所訂指標(biāo)切合實際,與國家農(nóng)業(yè)生產(chǎn),食品、飼料供應(yīng)的接受能力相符。黃曲霉毒素B1允許量國家標(biāo)準(zhǔn)的制訂中就體現(xiàn)出這種矛盾。AFB1強劇毒性、強致癌性物質(zhì)。單純從毒理學(xué)的觀念看待食品中的AFB1檢出即視為有毒,但也只能根據(jù)普查的實際情況,暫時依照目前規(guī)定的規(guī)范執(zhí)行。

  當(dāng)然,國外也存在同樣問題。1966年至1975年間,WHO/FA O就連續(xù)3次修訂了食品中黃曲霉毒素最高允許量標(biāo)準(zhǔn),將其從30ppb逐步降低至15ppb歐盟則規(guī)定從1998年起進口花生原料中的黃曲霉毒素*由20μg/kg,花生制品由10μg/kg統(tǒng)一降至4μg/kg即時將對黃曲霉毒素超標(biāo)的花生入口國自動關(guān)閉歐盟15國市場。這兩類有關(guān)真菌毒素國家規(guī)范的制訂工作中,建立檢測方法的工作進展較快。國從1989年開始進行真菌毒素免疫檢測方法國家規(guī)范的研究,至今已建立了黃曲霉毒素B1等7種真菌毒素的免疫檢測方法,其中有些已經(jīng)正式公布實施,有些在審批過程中,其它重要的真菌毒素也有化學(xué)法等檢測手段。國內(nèi)非臨床檢驗試劑中,真菌毒素的檢測首先引入了單克隆抗體免疫技術(shù)。發(fā)展還促進了對其它生物毒素的研究,如河豚魚毒素免疫檢測方法的建立。

  但是真菌毒素允許量國家標(biāo)的制訂仍然滯后。目前只有黃曲霉毒素B1M1脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、展等少數(shù)真菌毒素的允許量規(guī)范公布實施。一些真菌毒素雖然已列入規(guī)范制訂計劃,但遇到很大困難。有關(guān)管理部門對無法直接發(fā)生經(jīng)濟效益的項目資金投入十分有限。而體制改革以后,真菌毒素的污染普查工作中已很難無償組織地方單位共同協(xié)作。由于尚有一些規(guī)范亟待建立,而且AFB1這樣的非平安性規(guī)范也需要適時修訂,所以有關(guān)真菌毒素立法的任務(wù)十分艱巨。真菌毒素的檢測方法,主要是由各級各類衛(wèi)生監(jiān)督部門在執(zhí)法過程中使用,如果相應(yīng)的法規(guī)不配套,那么已經(jīng)建立的真菌毒素檢驗方法也就失去了用武之地。;以下是國內(nèi)幾種真菌毒素檢測方法的研究進展:1黃曲霉毒素B1黃曲霉毒素B1二氫呋喃氧雜萘的衍生物。即含有一個雙呋喃環(huán)和一個氧雜萘()前者為基本毒性結(jié)構(gòu),后者與致癌有關(guān)。

  國內(nèi)最早研究真菌毒素免疫檢測方法的中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所的孫宗棠,于1983年建立了AFB1單克隆抗體放射免疫測定方法。1992年,中國科學(xué)院上海細(xì)胞所李永鏞和上海醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院殷芬、俞順章等人合作建立了AFB1單克隆抗體的酶聯(lián)免疫檢測方法。中國預(yù)防醫(yī)科院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生研究所和江蘇微生物所也先后建立了AFB1多克隆抗體的酶聯(lián)免疫測定方法。北京市營養(yǎng)源研究所路戈與中國醫(yī)科院腫瘤研究所王德斌和衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所計融等人合作于1994年建立了規(guī)范的AFB1單克隆抗體酶聯(lián)免疫檢測方法,該法已列為國家規(guī)范(GB/T5009.2219961985年以前,另有幾種熒光色譜法列為國家規(guī)范(GB/T5009.231996;GB/T5009.241996其中薄層色譜法由衛(wèi)生研究所和青島商品檢驗局于1973年建立(GB/T5009.2219962T2毒素為劇毒(豬靜注LD50=1.2mg/kg,具有明顯的細(xì)胞毒,而且是體內(nèi)蛋白質(zhì)合成的抑制劑,有致畸性和致突變性。中毒后嘔吐,腹瀉,嚴(yán)重時損傷造血組織。

  T2毒素的免疫檢測方法由衛(wèi)生部食檢所陽傳和、羅雪云、計融于1991年建立(GB/T1493394方法檢出量為1ng/ml敏感范圍為41000ng/ml這是采用免疫技術(shù)建立的檢測真菌毒素的國家規(guī)范。3脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(嘔吐毒素,DON較早(1970年)被分離提純后命名的真菌毒素,毒性弱于T2毒素,小鼠經(jīng)口LD50=9.2mg/kg中毒癥狀類似,有明顯的致吐作用。DON經(jīng)對甲醛噴霧后呈黃色,衛(wèi)生部食檢所魏潤蘊于1986年建立了DON薄層層析檢測方法(GB/T14929.51994DON免疫檢測方法由衛(wèi)生部食檢所陽傳和、計融于1992年建立,方法檢出量為5ng/ml敏感范圍為51000ng/ml該法已批準(zhǔn)為國家標(biāo)準(zhǔn)(GB/T14929.51994小麥、面粉、玉米及玉米粉中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇*規(guī)范已于1996年9月1日頒布實施(GB163291996最高允許量為1000μg/kg4二乙酰鑣草鐮刀菌烯醇(DA S毒性強于T2毒素(豬靜注LD50=0.367mg/kg1992年,衛(wèi)生部食檢所李業(yè)鵬、羅雪云等用酶標(biāo)志單克隆抗體建立了檢測DA S雙抗夾心酶免疫斑點檢驗方法,檢出量為10ng/ml敏感范圍為21000ng/ml5玉米赤霉烯酮(ZENF2另外一種從赤霉病麥中分離出來的真菌毒素(化學(xué)名稱為610羥基-6氧基碳烯基)β-雷鎖酸-μ-內(nèi)酯,分子量為318主要污染小麥、大米、玉米、蕎麥等谷物,一種生殖系統(tǒng)毒素,有強烈致畸作用。


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