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犬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶（NOS3）ELISA試劑盒說明書
閱讀：135 發(fā)布時(shí)間：2019-9-18犬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(NOS3)ELISA試劑盒
英文簡稱：Canine endothelial nitric oxide synthase (NOS3) ELISA kit
產(chǎn)品貨號(hào)：KS16724
品牌名稱：科順生物
產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T
運(yùn)輸方式：快遞(根據(jù)客戶要求，選擇具體的運(yùn)輸方式)
產(chǎn)品價(jià)格：*，歡迎在線留言洽談！
使用范圍：僅供科研檢測,不得用于臨床.
犬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(NOS3)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠胰島素（INS）水平。用純化的小鼠胰島素（INS）捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入小鼠胰島素（INS），再與HRP標(biāo)記的檢測抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠胰島素（INS）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠胰島素（INS）含量。
犬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(NOS3)ELISA試劑盒組成：
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 |
|
封板膜 | 2片 | 2片 |
|
密封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) |
|
酶標(biāo)包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3ml×6管 | 0.3ml×6管 | 2-8℃保存 |
酶標(biāo)試劑 | 5 ml×1瓶 | 10 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
20×濃縮洗滌液 | 15ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
注：標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：40、20、10、5、2.5、0 mIU/L.
犬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(NOS3)ELISA試劑盒樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
犬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(NOS3)ELISA試劑盒操作步驟
- 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；。
- 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
- 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100μl，空白孔除外。
- 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
- 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
- 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
- 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
- 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
- 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
犬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(NOS3)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)：
- 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
- 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
- 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間zuei好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
- 請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，zuei好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第yi孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
- 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
- 底物請(qǐng)避光保存。
- 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
- 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
- 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。
計(jì)算：
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，
在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋
倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值
代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋
倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
犬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(NOS3)ELISA試劑盒相關(guān)產(chǎn)品:
KS16899 犬干擾素β(IFNβ)ELISA試劑盒
KS16900 犬干擾素α(IFNα)ELISA試劑盒
KS16901 犬肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒
KS16902 犬補(bǔ)體成分(C)ELISA試劑盒
KS16903 犬表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白A(SPA)ELISA試劑盒
KS16904 犬半乳糖苷酶β(GLβ)ELISA試劑盒
KS16905 犬白介素1α(IL1α)ELISA試劑盒
KS16906 犬白介素13(IL13)ELISA試劑盒
KS16907 犬白介素12B(IL12B)ELISA試劑盒
KS16908 犬白介素12A(IL12A)ELISA試劑盒
KS16909 犬氨基端前腦鈉素(NTProBNP)ELISA試劑盒
KS16910 犬P物質(zhì)(SP)ELISA試劑盒
KS16911 犬Endoglin蛋白(ENG)ELISA試劑盒
KS16912 犬Ⅰ型膠原α2(COL1α2)ELISA試劑盒
KS16913 犬10kDa干擾素γ誘導(dǎo)蛋白(IP10)ELISA試劑盒
KS16914 兔總*(TC)ELISA試劑盒
KS16915 兔子總堿性磷酸酶(TALP)ELISA試劑盒
KS16916 兔子腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體3(TRAILR3)ELISA試劑盒
KS16917 兔子脂多糖/內(nèi)毒素(LPS)ELISA試劑盒
KS16918 兔子粘蛋白1(MUC1)ELISA試劑盒
KS16919 兔子載脂蛋白B48(apoB48)ELISA試劑盒
KS16920 兔子游離脂肪酸(FFA)ELISA試劑盒
KS16921 兔子硬骨素(SOST)ELISA試劑盒
KS16922 兔子胰高血糖素(GC)ELISA試劑盒
KS16923 兔子血小板衍生生長因子AB(PDGFAB)ELISA試劑盒
KS16924 兔子血小板衍生生長因子AA(PDGFAA)ELISA試劑盒
KS16925 兔子血管緊張素17(Ang17)ELISA試劑盒
KS16926 兔子心肌肌鈣蛋白T(cTnT)ELISA試劑盒
KS16927 兔子纖溶酶原(Plg)ELISA試劑盒
KS16928 兔子脫氧膠原吡啶交聯(lián)(DPD)ELISA試劑盒
KS16929 兔子透明質(zhì)酸酶(HAase)ELISA試劑盒
KS16930 兔子肽聚糖(PG)ELISA試劑盒
KS16931 兔子髓過氧化物酶(MPO)ELISA試劑盒
KS16932 兔子生長激素(GH)ELISA試劑盒
KS16933 兔子神經(jīng)肽P(NPP)ELISA試劑盒
KS16934 兔子軟骨寡聚蛋白(COMP)ELISA試劑盒