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上海懋康生物科技有限公司

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TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽注意事項和操作流程

2021-12-21 閱讀(844)

 Phalloidin 鬼筆環(huán)肽;F-actin 肌動蛋白(聚合);G-actin 球形肌動蛋白(單體);Actin Polymerization 肌動蛋白聚合;Cytochalasin細胞松弛素;CAS NO.17466-45-4; 

產(chǎn)品信息

 

產(chǎn)品名稱

 

產(chǎn)品編號

 

規(guī)格

 

價格(元)

 

TRITC Phalloidin TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

MX4405-300T

300T

568

 

TRITC Phalloidin (Powder) TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

MX4406-1MG

1mg

4128

【溫馨提示】:見我司整理的鬼筆環(huán)肽及衍生物(Phalloidin and Phalloidin Conjugates)產(chǎn)品專題。

 

 

產(chǎn)品描述

 

鬼筆環(huán)肽(Phalloidin),又稱鬼筆鵝膏素,zui初是從毒蘑菇鬼筆鵝膏(Amanita phalloides)中分離到的一種七肽毒素,以*的親和力和特異性結(jié)合肌動蛋白絲F-actin(聚合形式的肌動蛋白),不會結(jié)合單體肌動蛋白(G-actin)。不像肌動蛋白抗體,同時識別單體和聚合形式的肌動蛋白。鬼筆環(huán)肽對大小纖維的親和力相近,在許多不同的動植物物種的肌肉和非肌肉細胞中,基本都按照一個肌動蛋白亞基與一個鬼筆環(huán)肽分子的化學(xué)計量比結(jié)合。不像肌動蛋白抗體,對不同物種或來源的肌動蛋白親和力會發(fā)生明顯變化。鬼筆環(huán)肽的非特異性結(jié)合幾乎可忽略,染色和未染色區(qū)域的差異極其明顯。鬼筆環(huán)肽使得肌動蛋白聚合/解離的臨界濃度降至1μg/ml,可用作一種聚合增強劑。另外,產(chǎn)生的復(fù)合物高度穩(wěn)定(解離常數(shù)約3×10–8 M),能夠抑制細胞松弛素、KI和溫度上升引起的去聚合和去組裝活性。 

鬼筆環(huán)肽及其衍生物在納摩爾濃度即可對F-actin染色,且水溶性良好,是非常實用和方便的探針,對組織切片、細胞培養(yǎng)物或無細胞體系內(nèi)的F-actin進行定性和定量研究。另外,鬼筆環(huán)肽及其衍生物很小,直徑約12–15 Å,分子量<2000 Da,經(jīng)標(biāo)記后的F-actin仍維持許多標(biāo)記前的功能。比如,標(biāo)記的甘油抽提肌纖維仍能收縮;標(biāo)記的肌動蛋白絲仍能在固相肌球蛋白基質(zhì)中移動。

 

本品為TRITC熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽(TRITC-Phalloidin),以溶于甲醇的20µM儲存液形式提供,具體的工作濃度請參考文獻或自身實驗體系來調(diào)整,常用濃度范圍80-200nM。按照100nM的工作濃度來算,可進行300次細胞染色。

 

 

產(chǎn)品應(yīng)用 

1)對固定的組織切片和組織細胞培養(yǎng)物進行肌動蛋白絲(F-actin)的熒光染色; 

2)體外制備穩(wěn)定的熒光肌動蛋白絲(F-actin);

 

 

注意事項 

1)本品(Cat# MX4405)以溶于甲醇的儲存液(20µM)形式提供,300T包裝,適合用量少的研究者;另提供凍干粉形式(Cat# MX4406),1mg包裝,相對更經(jīng)濟,適合用量多的研究者; 

2)本品具有一定的毒性,LD50=2mg/kg,操作時請注意防護。 

3)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

操作流程(免疫熒光染色)【詳見懋康整理】 

 

有幾種方法都能用來染色組織細胞培養(yǎng)物內(nèi)的肌動蛋白絲(F-actin染色,其中,固定步驟在獲得可信且具代表性的細胞F-actin分布情況中至關(guān)重要。固定步驟基于實驗自身需求來選擇。多聚甲醛或戊二醛都能得到優(yōu)秀的F-actin染色和良好的板狀偽足維持保存。 

一、實驗材料準(zhǔn)備 

二、染色工作液準(zhǔn)備

三、染色流程



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