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技術(shù)文章

ELISA試劑盒的保溫條件

閱讀:221發(fā)布時間:2016-5-16

   ELISA試劑盒在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加標本和加酶結(jié)合物后??乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育,有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當(dāng)。
ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機會,只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經(jīng)擴散才能達到反應(yīng)的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時間的溫育。
    溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時,產(chǎn)物的生成可達。為加速反應(yīng),可提高反應(yīng)的溫度,有些試驗在43℃進行,但不宜采用更高的溫度。但因所需時間太長,在ELISA中一般不予采用。
    保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,一般均采用水浴,可將ELISA板置于水浴箱中,ELISA板底應(yīng)貼著水面,使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,zui后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)定的溫度,特別是在氣溫較低的時候更應(yīng)如此。無論是水浴還是濕盒溫育,反應(yīng)板均不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應(yīng),操作時的室溫應(yīng)嚴格限制在規(guī)定的范圍內(nèi),標準室溫溫度是指20-25℃,但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育。室溫溫育時,ELISA板只要平置于操作臺上即可。應(yīng)注意溫育的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準確。為保證這一點,一個人操作時,一次不宜多于兩塊板同時測定。

BSEP    膽汁酸鹽輸出泵/ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白11抗體
Beta-2-MG(B2E5)    β2微球蛋白抗體(單抗)
Biglycan    骨/軟骨蛋白多糖1抗體
CAP    染色體相關(guān)蛋白CAP抗體
BECN1L1    Bcl-2同源結(jié)構(gòu)域樣蛋白1抗體
BAG6    Bcl2相關(guān)抗凋亡基因6抗體
B4GALT7    半乳糖轉(zhuǎn)移酶7亞基β1,4抗體
BEND5    BEN結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體
BBS5    巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS5抗體
BIN2    乳腺癌相關(guān)蛋白1抗體
Brain protein CG6    腦蛋白CG6抗體
BFSP2    晶狀體蛋白2抗體
C7orf27    7號染色體開放閱讀框27抗體
BCMP101    乳腺癌膜相關(guān)蛋白101抗體
BRLF1    立即早期癌基因BRLF1抗體(鼻咽癌基因)
BDNF    腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體
BACE2    β淀粉樣前體蛋白裂解酶2抗體
BHLHB5    螺旋一環(huán)一螺旋蛋白5抗體

ELISA試劑盒


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