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ELISA試劑大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1定量操作方法

閱讀:156發(fā)布時(shí)間:2016-3-30

ELISA試劑盒大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)定量采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,再加入酶標(biāo)工作液,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)濃度呈正相關(guān),450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,計(jì)算樣本中大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)含量。

1、ELISA試劑盒準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。 
3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本:取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,固定于框架上,分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔,記錄各孔位置,在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL;待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL,再加*40μL(即樣本稀釋5倍);空白對(duì)照孔不加。
4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。 
5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書操作洗板)。
6、ELISA試劑盒加酶標(biāo)工作液:每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,空白對(duì)照孔不加。
7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。 
8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書操作洗板)。 
9、顯色:每孔先加入顯色劑A液50μL,再加入顯色劑B液50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯色15min。 
10、終止:取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)

C1orf227    1號(hào)染色體開放閱讀框227抗體
C2orf71    2號(hào)染色體開放閱讀框71抗體
Caveolin-1    細(xì)胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體
CD82    腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白1抗體
Caspase-12    半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗體
CK17    細(xì)胞角蛋白17抗體
CD38    CD38抗體
CD38    CD38抗體
CA I    碳酸酐酶1抗體
CA II    碳酸酐酶2抗體
CK II Alpha    絲/*蛋白質(zhì)激酶抗體

ELISA試劑盒


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