氨基酸脫羧酶對照特殊培養(yǎng)法
二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序為：
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細(xì)胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細(xì)胞附著松動、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細(xì)胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個細(xì)胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細(xì)胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細(xì)胞，90%匯合時制成細(xì)胞懸液，再按105細(xì)胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細(xì)胞半?yún)R合時，準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細(xì)胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細(xì)胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時，*消化細(xì)胞制成懸液，按5×104（104細(xì)胞/cm2）接種入新氨基酸脫羧酶對照中。
4.48小時后，即可用于細(xì)胞克隆之用。
細(xì)胞分離（克隆）培養(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細(xì)胞，吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細(xì)胞懸液的制備：做克隆細(xì)胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細(xì)胞懸液，然后稀釋細(xì)胞，使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液，zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準(zhǔn)確，爭取在zui短時間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時后，待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺上，觀察和標(biāo)記下含有單個細(xì)胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液，只有在細(xì)胞增長過于緩慢時才可進(jìn)行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過多，余少許，以免細(xì)胞干涸。然后再迅速補加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細(xì)胞增至500~600個時，可進(jìn)行分離培養(yǎng)。
5.分離擴大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時后進(jìn)行觀察。挑選生長良好的單細(xì)胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細(xì)胞群即可，如過多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓時，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當(dāng)細(xì)胞離開底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細(xì)胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
相關(guān)產(chǎn)品如下：PA317 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
Ana-1 小鼠巨噬細(xì)胞
SRSV/3T3 SRSV轉(zhuǎn)化的3T3
CTLL-2 小鼠T細(xì)胞
CHL 中國倉鼠肺細(xì)胞
BRL 肝細(xì)胞
NRK 鼠腎細(xì)胞
L-6TG 肌母細(xì)胞
V79 中國倉鼠肺細(xì)胞
BHK 幼倉鼠腎細(xì)胞
CHO 中國倉鼠卵巢細(xì)胞
R1610 中國倉鼠體細(xì)胞
CHO/dhFr- 二氫*還原酶缺陷型CHO細(xì)胞
2BS 胚肺細(xì)胞
HLF 胚肺細(xì)胞
WI-38 胚肺細(xì)胞
SL-7 胚肺細(xì)胞
XJH B淋巴細(xì)胞
L-02 肝細(xì)胞
Chang Liver 張氏肝細(xì)胞
QSG-7701 小肝細(xì)胞
H.A. 羊膜細(xì)胞
293 Ad5DNA轉(zhuǎn)化的胚腎細(xì)胞
WISH 羊膜細(xì)胞
CV-1(M) 非洲綠猴腎
EBTr 牛胚氣管
VERO 非洲綠猴腎
MDBK 牛腎細(xì)胞
HepII 猴腎
COS-1 SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎
COS-7 SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎
LLC-MK2 恒河猴腎
MLA-144 長臂猿淋巴瘤
B95-8 EBV轉(zhuǎn)化的絨猴白細(xì)胞
NISE-Sacy-12 蓖麻蠶卵細(xì)胞
ZC-7901 草魚吻端細(xì)胞
RF/6A 猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜細(xì)胞(內(nèi)皮)
