Kovacs 氏靛基質試劑特殊培養(yǎng)法
二倍體細胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關鍵在于傳代，其傳代程序為：
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細胞附著松動、細胞質邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復吹打制成單個細胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細胞，90%匯合時制成細胞懸液，再按105細胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細胞半?yún)R合時，準備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時，*消化細胞制成懸液，按5×104（104細胞/cm2）接種入新Kovacs 氏靛基質試劑中。
4.48小時后，即可用于細胞克隆之用。
Kovacs 氏靛基質試劑細胞分離（克?。┡囵B(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細胞，吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細胞懸液的制備：做克隆細胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細胞懸液，然后稀釋細胞，使之成為1~2細胞/毫升懸液，zui適宜細胞密度為1~2細胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準確，爭取在zui短時間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標記：培養(yǎng)6~12小時后，待細胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺上，觀察和標記下含有單個細胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液，只有在細胞增長過于緩慢時才可進行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過多，余少許，以免細胞干涸。然后再迅速補加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細胞增至500~600個時，可進行分離培養(yǎng)。
5.分離擴大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時后進行觀察。挑選生長良好的單細胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細胞群即可，如過多，應吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細胞變圓時，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當細胞離開底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細胞群后，即轉用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
Kovacs 氏靛基質試劑相關產(chǎn)品如下：hz0225 人乳腺癌細胞 MDA-MB-231
hz0226 人乳腺癌細胞 MDA-MB-453
hz0227 人乳腺癌細胞 MDA-MB-468
hz0228 人乳腺癌細胞 ZR-75-1
hz0229 人乳腺癌細胞 ZR-75-30
hz0230 人乳腺導管癌 MDA-MB-435S
hz0231 人乳腺導管癌細胞 BT-474 [BT474]
hz0232 人乳腺管癌細胞 BT-549
hz0233 人乳腺管癌細胞 T-47D
hz0234 人乳腺浸潤性導管癌旁皮膚細胞 CCD-1095Sk
hz0235 人乳腺腺癌細胞 SK-BR-3
hz0236 人胚肺成纖維細胞 HFL-I
hz0237 人肺成纖維細胞 HFL1
hz0238 人胚肺成纖維細胞 MRC-5
hz0239 人胚肺成纖維細胞 WI-38
hz0240 人正常肺上皮細胞 BEAS-2B
hz0241 人退行性癌細胞 Calu-6
hz0242 人非小細胞肺癌細胞 A549
hz0243 人非小細胞肺癌細胞 NCI-H358
hz0244 人非小細胞肺癌細胞 NCI-H1650
hz0245 人非小細胞肺癌細胞 HCC827
hz0246 人經(jīng)典小細胞肺癌細胞 NCI-H1688
hz0247 人肺癌細胞(淋巴結轉移) NCI-H292
hz0248 人肺癌細胞株 MSTO-211H
hz0249 人肺扁平上皮癌細胞 QG-56
hz0250 人肺鱗癌細胞 SK-MES-1
hz0251 人肺腺癌細胞 LTEP-a-2
hz0252 人肺腺癌細胞 SPC-A-1
hz0253 人肺腺癌 (胸水) Calu-3
