支原體肉湯基礎(chǔ)（Frey）特殊培養(yǎng)法
二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序?yàn)椋?/span>
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細(xì)胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細(xì)胞附著松動、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細(xì)胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個細(xì)胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細(xì)胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細(xì)胞，90%匯合時制成細(xì)胞懸液，再按105細(xì)胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細(xì)胞半?yún)R合時，準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細(xì)胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細(xì)胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時，*消化細(xì)胞制成懸液，按5×104（104細(xì)胞/cm2）接種入新支原體肉湯基礎(chǔ)（Frey）中。
4.48小時后，即可用于細(xì)胞克隆之用。
支原體肉湯基礎(chǔ)（Frey）細(xì)胞分離（克?。┡囵B(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細(xì)胞，吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細(xì)胞懸液的制備：做克隆細(xì)胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細(xì)胞懸液，然后稀釋細(xì)胞，使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液，zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準(zhǔn)確，爭取在zui短時間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時后，待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺上，觀察和標(biāo)記下含有單個細(xì)胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液，只有在細(xì)胞增長過于緩慢時才可進(jìn)行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過多，余少許，以免細(xì)胞干涸。然后再迅速補(bǔ)加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細(xì)胞增至500~600個時，可進(jìn)行分離培養(yǎng)。
5.分離擴(kuò)大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時后進(jìn)行觀察。挑選生長良好的單細(xì)胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細(xì)胞群即可，如過多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓時，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當(dāng)細(xì)胞離開底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補(bǔ)加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細(xì)胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
支原體肉湯基礎(chǔ)（Frey）相關(guān)產(chǎn)品如下：hz0280 人膠質(zhì)瘤細(xì)胞 U251
hz0281 人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 A172
hz0282 人惡性黑色素瘤細(xì)胞 A-375
hz0283 人急性淋巴細(xì)胞白血病T淋巴細(xì)胞 CCRF-CEM [CCRF CEM]
hz0284 人Ph+急淋白血病細(xì)胞系 SUP-B15
hz0285 人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞 U-937
hz0286 人B淋巴母細(xì)胞 HMy2.CIR
hz0287 人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞 NAMALWA
hz0288 人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞 Raji
hz0289 人EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞 CGM1
hz0290 人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 A3
hz0291 人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 HuT 78
hz0292 人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 Jurkat, Clone E6-1
hz0293 人T細(xì)胞白血病細(xì)胞 6T-CEM
hz0294 人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 Dami
hz0295 人慢性髓原白血病細(xì)胞 K-562
hz0296 人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞 HEL
hz0297 人紅白血病細(xì)胞 Kasumi-1
hz0298 人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞 KU812
hz0299 人急性非B非T淋巴細(xì)胞白血病 Reh
hz0300 人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞 MOLT-4
hz0301 人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 MEG-01
hz0302 人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 Daudi
hz0303 人單核細(xì)胞白血病 THP-1
hz0304 人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞 HL-60
hz0305 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞, NK-92
hz0306 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞, NK-92MI
hz0307 人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞 JeKo-1
hz0308 小鼠X小鼠 PK136
hz0309 小鼠神經(jīng)細(xì)胞瘤與大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤之融合細(xì)胞 NG108-15 [108CC15]
hz0310 雜交瘤細(xì)胞CD25 PC 61 5.3 [PC 61; PC 61.5.3]
hz0311 中國倉鼠X小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤 MR1 [derivative of HB-11048]
hz0312 雜交瘤細(xì)胞抗AChE AE-1
hz0313 雜交瘤細(xì)胞抗AChE AE-2
hz0314 雜交瘤細(xì)胞抗CD2 OKT 11
hz0315 雜交瘤細(xì)胞抗CD2 35.1
hz-1101 DU145(前列腺癌細(xì)胞)
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