改良GAM 瓊脂基礎(chǔ)特殊培養(yǎng)法
二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序為：
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細(xì)胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細(xì)胞附著松動、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細(xì)胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個細(xì)胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細(xì)胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細(xì)胞，90%匯合時制成細(xì)胞懸液，再按105細(xì)胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細(xì)胞半?yún)R合時，準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細(xì)胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細(xì)胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時，*消化細(xì)胞制成懸液，按5×104（104細(xì)胞/cm2）接種入新改良GAM 瓊脂基礎(chǔ)中。
4.48小時后，即可用于細(xì)胞克隆之用。
改良GAM 瓊脂基礎(chǔ)細(xì)胞分離（克?。┡囵B(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細(xì)胞，吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細(xì)胞懸液的制備：做克隆細(xì)胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細(xì)胞懸液，然后稀釋細(xì)胞，使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液，zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準(zhǔn)確，爭取在zui短時間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時后，待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺上，觀察和標(biāo)記下含有單個細(xì)胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液，只有在細(xì)胞增長過于緩慢時才可進(jìn)行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過多，余少許，以免細(xì)胞干涸。然后再迅速補(bǔ)加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細(xì)胞增至500~600個時，可進(jìn)行分離培養(yǎng)。
5.分離擴(kuò)大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時后進(jìn)行觀察。挑選生長良好的單細(xì)胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細(xì)胞群即可，如過多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓時，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當(dāng)細(xì)胞離開底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補(bǔ)加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細(xì)胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
改良GAM 瓊脂基礎(chǔ)相關(guān)產(chǎn)品如下：hz1194 疊氮鈉葡萄糖肉湯 250g 用于鏈球菌的增菌培養(yǎng)
Aziode Dextrose Broth
hz1195 乙基紫疊氮鈉肉湯 250g 用于鏈球菌的增菌培養(yǎng)
Ethyl Violet Aziode Broth
hz1196 KF鏈球菌瓊脂 100g 用于鏈球菌的選擇性分離及計數(shù)（SN標(biāo)準(zhǔn)）
KF Streptococcus Agar
阪崎腸桿菌檢驗培養(yǎng)基
hz1075 緩沖蛋白胨水（BPW） 250g 用于阪崎桿菌前增菌培養(yǎng)（GB2008標(biāo)準(zhǔn)）
Buffered Peptone Water
hz1014 胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA） 250g 用于奶粉中阪崎桿菌的純化培養(yǎng)和產(chǎn)黃色素試驗(GB2008、SN標(biāo)準(zhǔn))
Tryptic Soy Agar
hz1020 腦心浸出液肉湯 250g 用于細(xì)菌的增菌培養(yǎng)
Brain Heaet Infusion Broth
hz1201 改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-*（mLST-Vm） 250g 用于阪崎桿菌選擇性增菌培養(yǎng)（GB2008標(biāo)準(zhǔn)）
Modifield Lauryl Sulfate Tryptose Broth
hz1818 阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基（DFI瓊脂） 1000ml 用于阪崎桿菌的顯色培養(yǎng)，阪崎桿菌顯藍(lán)色，其它腸桿菌顯無色。
Chromogenic Enterbacter Sakazakii Agar
hz1202 結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂（VRBGA） 250g 用于奶粉中阪崎桿菌的分離培養(yǎng)(FDA、SN方法)
Violet Red Bile Glucose Agar
hz1050 腸道菌增菌肉湯(EE) 250g 用于腸道菌的增菌培養(yǎng)(FDA、SN 標(biāo)準(zhǔn))
Enterobacteria Enrichment Broth
hz1051 西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂 250g 用于腸道菌的檸檬酸鹽利用試驗(GB標(biāo)準(zhǔn))
Simmons Citrate Agar
產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗培養(yǎng)基
hz1211 胰月示-亞硫酸鹽-環(huán)*瓊脂基礎(chǔ)（TSC） 250g 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的平板計數(shù)(SN標(biāo)準(zhǔn))
hz1212 產(chǎn)芽孢肉湯 250g 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的產(chǎn)芽孢培養(yǎng)(SN標(biāo)準(zhǔn))
hz1213 亞硫酸鹽-多粘菌素-*瓊脂基礎(chǔ) 250g 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的平板計數(shù)(GB標(biāo)準(zhǔn))
hz1214 多價蛋白胨-酵母膏（PY）培養(yǎng)基 250g 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的培養(yǎng)(SN標(biāo)準(zhǔn))
hz1215 皰肉培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250g 加入牛肉粒,用于肉毒梭菌及厭氧梭狀芽孢桿菌的檢驗(GB標(biāo)準(zhǔn))
hz1216 皰肉牛肉粒 100g 加入皰肉基礎(chǔ)中，配成皰肉培養(yǎng)基
hz1017 液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基 250g 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌確證試驗的細(xì)菌培養(yǎng)(GB.SN標(biāo)準(zhǔn))
hz1218 卵黃瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250g 用于肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)）
hz1219 動力-硝酸鹽培養(yǎng)基 250g 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的動力試驗
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