馬丁培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)法
二倍體細胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序為：
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細胞附著松動、細胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個細胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細胞，90%匯合時制成細胞懸液，再按105細胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細胞半?yún)R合時，準備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時，*消化細胞制成懸液，按5×104（104細胞/cm2）接種入新馬丁培養(yǎng)基中。
4.48小時后，即可用于細胞克隆之用。
細胞分離（克?。┡囵B(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細胞，吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細胞懸液的制備：做克隆細胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細胞懸液，然后稀釋細胞，使之成為1~2細胞/毫升懸液，zui適宜細胞密度為1~2細胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準確，爭取在zui短時間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時后，待細胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺上，觀察和標(biāo)記下含有單個細胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液，只有在細胞增長過于緩慢時才可進行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過多，余少許，以免細胞干涸。然后再迅速補加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細胞增至500~600個時，可進行分離培養(yǎng)。
5.分離擴大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時后進行觀察。挑選生長良好的單細胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細胞群即可，如過多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細胞變圓時，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當(dāng)細胞離開底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
相關(guān)產(chǎn)品如下：hz0591 人腎上腺神經(jīng)母細胞瘤細胞(腦轉(zhuǎn)移) KP-N-NS細胞,
hz0592 人腎上腺皮質(zhì)小細胞癌細胞,SW-13細胞
hz0593 人腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞,NCI-H295R細胞
hz0594 人腎上皮細胞,GES細胞
hz0595 人腎乳頭狀細胞癌細胞,SKRC39細胞
hz0596 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞,HK-2細胞
hz0597 人腎母細胞瘤細胞,SK-NEP-1細胞,
hz0598 人腎癌細胞系(769-P) 769-P細胞
hz0599 人腎癌細胞系 ACHN細胞
hz0600 人腎癌細胞系 A498細胞
hz0601 人腎癌細胞,SK-RC-42細胞
hz0602 人腎癌細胞,OS-RC-2細胞
hz0603 人腎癌細胞,Ketr-3細胞
hz0604 人腎癌細胞,KC細胞
hz0605 人腎癌細胞,GRC-1細胞
hz0606 人腎癌細胞,A498細胞,
hz0607 人腎癌細胞,A498-EGFP-puro細胞
hz0608 人腎癌Wilms細胞,G401細胞
hz0609 人神經(jīng)上皮瘤細胞,SK-N-SH細胞
hz0610 人神經(jīng)上皮瘤細胞,SK-N-MC細胞
hz0611 人神經(jīng)上皮瘤細胞,SH-SY5Y細胞
hz0612 人神經(jīng)母細胞瘤細胞株 SH-SY5Y細胞
hz0613 人神經(jīng)母細胞瘤細胞,SK-N-SH細胞
hz0614 人神經(jīng)母細胞瘤細胞,SK-N-BE(2)細胞
hz0615 人神經(jīng)母細胞瘤細胞,SH-SY5Y細胞
hz0616 人神經(jīng)母細胞瘤細胞,M，BE(2)-M17細胞
hz0617 人神經(jīng)母細胞瘤細胞,IMR-32細胞,
hz0618 人神經(jīng)母細胞瘤細胞,BE(2)-M17細胞
hz0619 人神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤細胞,U251細胞
hz0620 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞,BT-325細胞
hz0621 人神經(jīng)癌細胞,SF-268細胞
hz0622 人舌鱗癌細胞系 TSCCA細胞
hz0623 人舌鱗癌細胞,TCA8113細胞
hz0624 人舌鱗癌細胞,Tca-8113-EGFP細胞
