BTB 培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)法
二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序為：
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細(xì)胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細(xì)胞附著松動、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細(xì)胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個細(xì)胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細(xì)胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細(xì)胞，90%匯合時制成細(xì)胞懸液，再按105細(xì)胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細(xì)胞半?yún)R合時，準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細(xì)胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細(xì)胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時，*消化細(xì)胞制成懸液，按5×104（104細(xì)胞/cm2）接種入新BTB 培養(yǎng)基中。
4.48小時后，即可用于細(xì)胞克隆之用。
BTB 培養(yǎng)基細(xì)胞分離（克?。┡囵B(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細(xì)胞，吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細(xì)胞懸液的制備：做克隆細(xì)胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細(xì)胞懸液，然后稀釋細(xì)胞，使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液，zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準(zhǔn)確，爭取在zui短時間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時后，待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺上，觀察和標(biāo)記下含有單個細(xì)胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液，只有在細(xì)胞增長過于緩慢時才可進行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過多，余少許，以免細(xì)胞干涸。然后再迅速補加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細(xì)胞增至500~600個時，可進行分離培養(yǎng)。
5.分離擴大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時后進行觀察。挑選生長良好的單細(xì)胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細(xì)胞群即可，如過多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓時，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當(dāng)細(xì)胞離開底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細(xì)胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
BTB 培養(yǎng)基相關(guān)產(chǎn)品如下：hz-743 大鼠氣管上皮細(xì)胞
hz-744 兔眼Tenon's囊成纖維細(xì)胞
hz-745 小鼠乳腺癌細(xì)胞
hz-746 腎上皮細(xì)胞
hz-747 大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞
hz-748 小鼠肺腺癌細(xì)胞系
hz-749 鼬肺上皮細(xì)胞
hz-750 兔晶體上皮細(xì)胞永生系
hz-751 大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞
hz-752 小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞
hz-753 小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞
hz-754 倉鼠/小鼠雜交瘤細(xì)胞
hz-755 小鼠T淋巴細(xì)胞
hz-756 大鼠骨髓瘤細(xì)胞
hz-757 小鼠單核巨噬細(xì)胞
hz-758 小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化)
hz-759 狗腎細(xì)胞隆突型
hz-760 綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠前胃癌細(xì)胞
hz-761 小鼠腎足細(xì)胞
hz-762 小鼠子宮頸癌細(xì)胞
hz-763 綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠子宮頸癌細(xì)胞
hz-764 小鼠漿細(xì)胞瘤
hz-765 轉(zhuǎn)PYTL基因小鼠睪丸支持細(xì)胞
hz-766 BALB/C小鼠肝上皮細(xì)胞
hz-767 小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞
hz-768 小鼠網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤
hz-769 小鼠正常肝細(xì)胞
