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上海滬震實(shí)業(yè)有限公司
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閱讀:415發(fā)布時(shí)間:2017-10-31
免疫組化實(shí)驗(yàn)常見問題和解決方法
染色過強(qiáng)
原因 | 解決方法 |
抗體的濃度過高或抗體孵育時(shí)間過長(zhǎng) | 降低抗體滴度(一般指濃縮性抗體) 抗體孵育時(shí)間:室溫1小時(shí)或4℃過ye |
孵育溫度過高,孵育溫度超過37℃ | 一般室溫20-28℃ |
DAB 顯色時(shí)間過長(zhǎng)或 DAB 濃度過高 | 顯色時(shí)間不能超過5-10分鐘,以顯微鏡下觀察為準(zhǔn) |
非特異性背景染色
原因 | 解決方法 |
操作過程中沖洗不充分 | 每步?jīng)_洗3×5 |
組織中含過氧化物酶未阻斷 | 可再配置新鮮3%H2O2封閉,孵育時(shí)間延長(zhǎng) |
組織中含內(nèi)源性* | 正常非免疫動(dòng)物血清再封閉 |
血清蛋白封閉不充分 | 延長(zhǎng)血清蛋白封閉時(shí)間 |
染色弱
原因 | 解決方法 |
抗體濃度過低,孵育時(shí)間過短 | 提高抗體濃度,孵育時(shí)間不能少于60分鐘 |
試劑超過有效使用期 | 及時(shí)更換試劑 |
操作中,滴加試劑時(shí)緩沖液未瀝干,致使試劑稀釋 | 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液(但防止切片干燥) |
室溫太低,低于15℃ | 若室溫低于15度,要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘(或4℃冰箱過ye) |
蛋白封閉過度 | 封閉時(shí)間不要超過10分鐘 |
染色陰性
原因 | 解決方法 |
操作步驟錯(cuò)誤 | 重新試驗(yàn),設(shè)立陽性對(duì)照 |
組織中無抗原 | 設(shè)立陽性對(duì)照片,以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤 | 仔細(xì)確定一抗與二抗種屬無誤 |
商鋪:http://m.aiynx.com/st150152/
主營(yíng)產(chǎn)品:專業(yè)生產(chǎn)ELISA試劑盒,生化試劑,細(xì)胞株,分子生物學(xué),生化檢測(cè)試劑盒,金標(biāo)檢測(cè)試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)品 ,抗體,等產(chǎn)品 .
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