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公司動(dòng)態(tài)

免疫組化實(shí)驗(yàn)常見問題和解決方法

閱讀:415發(fā)布時(shí)間:2017-10-31

免疫組化實(shí)驗(yàn)常見問題和解決方法

染色過強(qiáng)

原因解決方法
抗體的濃度過高或抗體孵育時(shí)間過長(zhǎng)

降低抗體滴度(一般指濃縮性抗體) 抗體孵育時(shí)間:室溫1小時(shí)或4℃過ye

孵育溫度過高,孵育溫度超過37℃一般室溫20-28℃
DAB 顯色時(shí)間過長(zhǎng)或 DAB 濃度過高顯色時(shí)間不能超過5-10分鐘,以顯微鏡下觀察為準(zhǔn)

非特異性背景染色

原因解決方法
操作過程中沖洗不充分每步?jīng)_洗3×5
組織中含過氧化物酶未阻斷可再配置新鮮3%H2O2封閉,孵育時(shí)間延長(zhǎng)
組織中含內(nèi)源性*正常非免疫動(dòng)物血清再封閉
血清蛋白封閉不充分延長(zhǎng)血清蛋白封閉時(shí)間

染色弱

原因解決方法
抗體濃度過低,孵育時(shí)間過短提高抗體濃度,孵育時(shí)間不能少于60分鐘
試劑超過有效使用期及時(shí)更換試劑
操作中,滴加試劑時(shí)緩沖液未瀝干,致使試劑稀釋每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液(但防止切片干燥)
室溫太低,低于15℃若室溫低于15度,要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘(或4℃冰箱過ye)
蛋白封閉過度封閉時(shí)間不要超過10分鐘

染色陰性

原因解決方法
操作步驟錯(cuò)誤重新試驗(yàn),設(shè)立陽性對(duì)照
組織中無抗原設(shè)立陽性對(duì)照片,以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果
一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤仔細(xì)確定一抗與二抗種屬無誤
 

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