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Western Blot染色的選擇

閱讀:362發(fā)布時間:2016-11-3

Western Blot染色的選擇

OO.Western Blot哪種染色好?
解答:(1)陰離子染料是zui常用的,特別是氨基黑,脫色快,背景低檢測極限可達到1.5μg,考馬雖然與氨基黑有相同的靈敏度,但脫色慢,背景高。麗春紅S和快綠在檢測后容易從蛋白質(zhì)中除去 ,以便進行隨后的氨基酸分析。缺點是:溶劑系統(tǒng)的甲醇會引起硝化纖維素膜的 皺縮或破壞。不能用語正電賀的膜。靈敏度低。
(2)膠體金,靈敏度高,檢測范圍可到pg級,但染色比穩(wěn)定。
(3)*化靈敏度位于1、2之間,可用于任何一種膜。

7.參照的疑問

PP.是否Western Blot實驗半定量一定要加ACTIN內(nèi)參?
解答:對于發(fā)表文章的實驗加內(nèi)參,實驗嚴謹。

.用BANDSCAN分析結(jié)果行嗎?
解答:分析一般的結(jié)果沒問題。

RR.核內(nèi)抗原Western Blot內(nèi)參選擇什么合適?
解答:可以選用組蛋白,組蛋白在細胞核中的表達是很穩(wěn)定的,有很多都可以當成內(nèi)參,在網(wǎng)上查查就可以選出你要的內(nèi)參。

SS.轉(zhuǎn)膜時采用電流是否比電壓準確,是否根據(jù)0.8mA/cm2,一般1小時左右?
解答:不是的, 半干法*用恒流,一般根據(jù)目的蛋白的大小來確定電流和時間。

TT.做半定量人卵巢癌細胞系的Western Blot,內(nèi)參B-actin,GAPDH,那個好?
解答:選用beta-actin就可以。


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