人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞(NK-92)
貨號：HIMCL-060
細胞介紹
NK-92 是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的 50 歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株白細胞介素-2 依賴型 NK 細胞株。這株細胞對很多惡性細胞有細胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死 K562 和 Daudi 細胞。NK-92 細胞(經(jīng)過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細胞的功能。
NK-92 細胞有以下特征：CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54 表面標記陽性，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34 和HLA-DR
表面標記陰性。
細胞特性
1）來源：惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞
2）形態(tài)：淋巴母細胞
3）含量：>1x106 個/mL
4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規(guī)格：T75 瓶或者 1mL 凍存管包裝
運輸和保存：使用含有胎牛血清的 2ml 凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在 1000RPM，常溫條件下，離心 5min 后，于潔凈操作臺棄去上清，加入*使用的培養(yǎng)基后轉移至 10cm 培養(yǎng)皿或者 T75 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
細胞用途：僅供科研使用。
細胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備 RPMI-1640 培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號 21875-091)，75%；添加 0.2mM 肌醇，0.1mM β-Me，0.02mM *，100U IL-2，馬血清 12.5%，胎牛血清，12.5%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱
濕度為 70%-80%。3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按 1：2 到 1：3 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM 條件下離心 4 分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入 10%DMSO 后進行凍存。
注意事項：
- 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。
- 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
