細胞傳代培養(yǎng)總結
1、什么是細胞培養(yǎng)
培養(yǎng)的細胞由于細胞增殖，數量增加，細胞難以繼續(xù)生長繁殖，需要進行分瓶培養(yǎng)，將培養(yǎng)的細胞分散，以1:2或1:3以上的比率轉移到另外的容器中進行培養(yǎng)，即為傳代培養(yǎng)，一般細胞可傳代10-50代
2、細胞的貼壁過程
3、培養(yǎng)細胞的一代生長過程
①潛伏期：細胞從接種到貼壁生長繁殖的一段時間
二倍體細胞系該段時間較長，大概為24-96h；連續(xù)細胞系時間短，大概10-30min
②指數生長期：細胞增殖zui旺盛時期，此時進行細胞實驗較佳
指數生長期持續(xù)3-5d后，隨細胞數量不斷增多，生長空間日趨減少，細胞相互接觸匯合成片，呈現接觸抑制。而惡性細胞則無接觸抑制現象；癌細胞則由于營養(yǎng)成分的消耗和細胞代謝產物的影響而發(fā)生密度抑制。
③停滯期：細胞數量達到飽和密度后，細胞與營養(yǎng)液的交換面積減少，代謝產物積累，pH下降細胞停止增殖，進入停滯期。此時應該進行細胞傳代，但是得傳1-2代細胞才能恢復。
4、細胞傳代的一般步驟
a、懸浮細胞
可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進行傳代，或用離心法后，加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進行傳代
b、貼壁細胞
①實驗準備，超凈臺噴灑酒精，紫外照射30min。準備好培養(yǎng)瓶/皿，離心管，10%DMEM，0.25%*，D-hanks液等，帶上手套，口罩等
②倒去舊培養(yǎng)基，用D-hanks液清洗一遍，去除沉積的死細胞等
③加入2ml 0.25％*消化液，消化2～3min，倒置顯微鏡下觀察，待細胞單層收縮突起出現空隙時，倒去酶液。
④加入1～2滴管含有血清的培養(yǎng)液，反復吹打細胞，使其成細胞懸液
⑤以1：2或1：3進行分裝，補充新鮮培養(yǎng)基，并在培養(yǎng)瓶上做好標記，注明代號、日期，輕輕搖勻，37 ℃CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
⑥細胞培養(yǎng)24h后，即可觀察培養(yǎng)液的顏色及細胞的生長情況
5注意事項
①傳代培養(yǎng)時要注意無菌操作并防止細胞之間的交叉污染。所有操作要盡量靠近酒精燈火焰。每次只進行一種細胞的操作。每一種細胞使用一套器材。培養(yǎng)用液應嚴格分開。
②傳代時間的掌握：每天觀察細胞形態(tài)，掌握好細胞是否健康的標準：健康細胞的形態(tài)飽滿，折光性好，生長致密時即可傳代。
③消化時間的掌握
