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上海滬震實業(yè)有限公司

經(jīng)營模式：生產(chǎn)廠家

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所在地區(qū)：上海上海市

聯(lián)系人：游艷（經(jīng)理）

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技術(shù)文章

柱式DNAback說明書

閱讀：379發(fā)布時間：2017-10-16

柱式DNAback

Column DNAback

產(chǎn)品及特點

本試劑盒用于從瓊脂糖凝膠中或DNA反應(yīng)體系中(如PCR反應(yīng))回收DNA段。試劑盒采用可以、專一結(jié)合DNA的硅膠膜和*的溶膠體系，可以從瓊脂糖凝膠中或DNA反應(yīng)體系中快速回收DNA段，回收效率可達50-90%（跟片段大小相關(guān)）。本產(chǎn)品的特點如下:

1. ，回收效率zui高可達90%（跟片段大小和膠濃度等因素有關(guān)），可以跟國外廠家的產(chǎn)品媲美。

2. 快速，整個過程只需要十余分鐘。洗脫液不需要額外加乙醇。

3. 兩用，既可用于膠回收，也可以用于PCR或其他酶反應(yīng)回收。

4. 范圍廣，回收DNA的長度范圍為50 bp-40 Kb（但效率各不相同）。

5. 能回收單鏈、雙鏈及環(huán)狀DNA，zui大吸附量為10ug。

6. 回收的DNA可直接用于酶切、連接、PCR、測序等多種分子生物學(xué)實驗。

7. 本試劑盒足夠純化50片含DNA的瓊脂糖凝膠條（每片膠條重量不超過250mg），可以純化50次酶反應(yīng)（包括PCR反應(yīng)，每次體積不超過250uL）。

規(guī)格及成分

成份	編號	50次大紙盒包裝
通用溶膠液2.0	170601	25 mL
吸附柱活化液	170602	25 mL
通用洗柱液	60408	50 mL
離心吸附柱(13層)	170606	50 套
DNA洗脫液3.0	170603	10 mL
使用手冊	60202sc	1份

運輸及保存

常溫運輸及保存，有效期為一年。由于通用溶膠液2.0是高鹽溶液，因此在低溫時容易產(chǎn)生沉淀。如果產(chǎn)生沉淀，需要60℃加熱溶解后才可以使用。

自備試劑

異丙醇

使用方法

一：對膠回收：

用干凈的刀片切取含DNA段的瓊脂糖凝膠（100 mg左右，盡可能多地把多余的膠切除，否則會影響回收效率），放入一干凈的1.5 mL塑料離心管（自備）中稱重，按重量比為1：2的比例加入通用溶膠液2.0 (0.1 g的瓊脂糖凝膠需要加入0.2mL的通用溶膠液2.0)。如果瓊脂糖凝膠的濃度大于2%，則需要按1：3的比例加入通用溶膠液2.0溶解膠塊。
50℃保溫10分鐘使膠*溶化，每隔2-3分鐘振蕩數(shù)次以促進瓊脂糖凝膠的溶化。如果片段長度在300bp以下，建議不要50℃保溫，而是延長溶膠時間，以免DNA變性，影響回收率。
在等待期間，活化離心吸附柱。在離心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液，套上收集管后室溫放置2分鐘，然后12,000 rpm離心2分鐘，倒棄穿透液，再將吸附柱套上收集管后待用?；罨蟮碾x心吸附柱必須在當(dāng)天使用。
在上柱前，在溶化的膠中加入相當(dāng)于膠塊體積1/2的異丙醇（對100mg膠塊，加50uL），快速振蕩10秒混勻。
將溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，套上收集管，靜置3分鐘。注意：靜置有助于DNA與離心吸附柱的硅膠膜結(jié)合。本產(chǎn)品提供的離心吸附柱的zui大上樣體積為0.8mL，若溶膠液的總體積大于0.8mL，一次加不完，可以分多次將溶液加入到吸附柱中。
12000-15000 g離心1分鐘，倒掉收集管中的穿透液。
加入0.7mL通用洗柱液于離心柱中，12000-15000 g離心1分鐘，倒棄收集管中的廢液。如果回收的DNA用于鹽敏感實驗（如平末端連接或直接測序）,建議加入通用洗柱液后靜置2-5分鐘再離心。
12000-15000 g離心半分鐘以去除離心柱中的殘留液體。
將離心柱吸附置于一新的干凈的塑料離心管（自備）中，懸空加入50 uL DNA洗脫液于離心吸附柱硅膠膜的*。注意：如果回收的DNA用于測序，則可用重蒸水（自備）洗脫DNA。DNA洗脫液可以也用TE替代，但用水或TE替代DNA洗脫液3.0時，回收率可能稍有降低。
靜置3分鐘后12000-15000 g離心1分鐘。
離心管底部所得溶液即為純化的DNA溶液，可立即用于后續(xù)實驗或者放-20℃長期保存。如果將所得DNA溶液再次加回到離心吸附柱中，重復(fù)洗脫過程，將得到更多的DNA。
用電泳方法或測OD方法確定回收所得DNA的濃度，1 OD260對應(yīng)的濃度是50ug/mL（對雙鏈DNA）或40ug/mL（對單鏈DNA），純凈DNA的OD260/OD280比值應(yīng)該在1.8左右。注意：OD讀數(shù)跟pH相關(guān)，如果用自備的重蒸水洗脫，OD值會低于在DNA洗脫液3.0中測定的數(shù)字。

二：PCR或其他酶反應(yīng)回收

直接在PCR或其他酶反應(yīng)管中加2倍體積的通用溶膠液2.0，振蕩10秒混勻。如果PCR反應(yīng)中使用了石蠟，需要預(yù)先去除。
活化離心吸附柱。在離心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液，套上收集管后室溫放置2分鐘，然后12,000 rpm離心2分鐘，倒棄穿透液，再將吸附柱套上收集管后待用?；罨蟮碾x心吸附柱必須在當(dāng)天使用。
在上柱前，在反應(yīng)液和溶膠液的混合液中加入相當(dāng)于反應(yīng)體積1/2的異丙醇（對100uL的反應(yīng)液，加50uL），快速振蕩10秒混勻。
直接進入上面膠回收操作的第5步并進行后面的操作。

注意事項

1. 電泳回收DNA時，電泳緩沖液可以用TAE、TBE或者本公司的超快電泳液。回收效果為SuperBuffer-2，TAE次之，TBEzui差。

通用洗柱液含有容易揮發(fā)物質(zhì)，使用后一定要擰緊瓶蓋，密閉保存。
瓊脂糖凝膠體積的大小與回收率成反比關(guān)系，即體積越大，越不利于回收，一次膠回收以使用100 mg瓊脂糖凝膠為宜。
如果在5-10分鐘內(nèi)凝膠溶化不*，可以適當(dāng)?shù)难娱L水浴時間以使膠充分溶化，否則DNA包裹在瓊脂糖凝膠中，影響DNA的回收效率。
膠溶化后的液體轉(zhuǎn)移到離心柱后，可以延長靜置時間使DNA與膜充分結(jié)合，提高回收效率。
洗脫DNA前的空甩很重要，其目的是去除膜上殘留酒精，否則殘留酒精會影響后續(xù)DNA反應(yīng)。

7. 增大DNA洗脫液使用量有利于回收，但要注意實際上樣量與zui終回收體積的關(guān)系，以便于計算回收率。DNA洗脫液可以用TE或水替代，但回收率稍有降低。

疑難解答

Q：為何用硅膠膜吸附柱法回收TBE膠中的DNA效果不好？

A：因為TBE中的硼酸會跟硅膠表面的OH基團反應(yīng)，而這些OH又是吸附

DNA所必需的。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品

一管式膠回收試劑(CAT#:60706)、天恩澤超級電泳液(CAT#:151103)、綠如藍低毒核酸染料(CAT#:70303)

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