細(xì)胞培養(yǎng)室的滅菌與消毒
細(xì)胞培養(yǎng)對無菌環(huán)境的要求較為嚴(yán)格。細(xì)胞培養(yǎng)間的殺菌主要涉及空氣的殺菌，其常見的四種方法如下。
1、甲醛熏蒸
甲醛是一種能化學(xué)滅菌劑。不易燃、不爆炸、不腐蝕金屬。它能與蛋白質(zhì)中的氨基酸結(jié)合而使蛋白變性，使酶的活性消失。故有強(qiáng)大的殺菌作用。一般稱作為“大消”，用來對細(xì)胞間進(jìn)行*的消毒殺菌。但是甲醛是一種對人體有害的物質(zhì)，并且細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室一般空氣流通都很差，甲醛的排出也很慢，至少要一周以上。如果要緊急使用的話，在甲醛滅菌完后，可以用等量的氨水中和空氣中的甲醛。
2、空氣過濾（恒溫恒濕裝置）
這是一種zui安全，殺毒效果也的方法，只是費(fèi)用較為昂貴。衡量空氣潔凈度的級別標(biāo)準(zhǔn)如下表1。
表1 潔凈室（區(qū)）空氣潔凈度級別表
潔凈度級別 塵粒zui大允許數(shù)/立方米 微生物zui大允許數(shù)/立方米 浮游菌/立方米 沉降菌/皿
100級 3500 0 5 1
10000級 350000 2000 100 3
100000級 3500000 20000 500 10
300000級 10350000 60000 - 15
3、紫外線燈殺菌
紫外線滅菌是用紫外線管照射進(jìn)行的。波長在220-300nm的紫外線稱為“殺生命區(qū)”，其中以260nm的殺菌力zui強(qiáng)。紫外線作用于細(xì)胞DNA，使DNA鏈上相鄰的嘧啶堿形成嘧啶二聚體（如胸腺嘧啶二聚體），抑制了DNA復(fù)制。另外，空氣在紫外線照射下可以產(chǎn)生臭氧，臭氧也有一定的殺菌作用。紫外線透過物質(zhì)的能力很差，適用于空氣及物體表面的滅菌，與被照物的距離以不超過1.2m為易，照射時間以紫外線燈管的功率大小、被照空間及面積大小，根據(jù)滅菌效果測定結(jié)果而定。由于上述各種情況的不確定性，導(dǎo)致紫外線殺菌效果不是很理想，一般需要過夜殺菌。此外紫外線對人體有傷害作用，不要在紫外線燈照射下進(jìn)行操作。
4、電子消毒滅菌器殺菌
即臭氧滅菌。在高壓電場作用下，電子管的內(nèi)外電極發(fā)生強(qiáng)烈電子轟擊，使空氣電離而將空氣中的氧轉(zhuǎn)換成臭氧。臭氧在常溫、常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，很快自行分解成氧氣（O2）和單個氧原子（O）；后者具有很強(qiáng)的活性，能同細(xì)菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進(jìn)行氧化分解反應(yīng)，從而靠氧原子的彌漫性擴(kuò)散達(dá)到殺菌之目的，消毒時沒有死角。消毒后空間的殘留的多余氧原子只需30～40min則會自行重新結(jié)合成為普通氧原子（O2），不存在任何有毒殘留物，故稱無污染消毒劑，它不但對各種細(xì)菌（包括肝炎病毒，大腸桿菌，綠濃桿菌及雜菌等）有*的殺滅能力，而且對殺死霉素也很有效。
此外，細(xì)胞培養(yǎng)間的地板也應(yīng)定期使用新潔爾滅進(jìn)行消毒滅菌，并打掃干凈；培養(yǎng)箱、桌面定期用75%的酒精進(jìn)行擦拭消毒，防止污染。
會員1.png)