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技術(shù)文章

細(xì)胞復(fù)蘇流程

閱讀:590發(fā)布時(shí)間:2017-6-5

細(xì)胞復(fù)蘇流程

復(fù)蘇操作步驟:
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃
2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺(tái)臺(tái)面。
3.在超凈工作臺(tái)中按次序擺放好消過(guò)毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等
迅速解凍:
1.    迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動(dòng),使管中的液體迅速融化,時(shí)間控制在1分鐘左右
離心去除凍存液:
1.  融解好的細(xì)胞迅速放進(jìn)離心機(jī)中,2000r/min 或者600g離心2min
2.  吸棄上清液。
3.  用4-5ml*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,吹打制成單細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜。
4.  將復(fù)蘇好的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),將培養(yǎng)瓶放入37℃和5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi),8-24小時(shí)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),換液的時(shí)間由細(xì)胞生長(zhǎng)情況而定。


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