成纖維細胞培養(yǎng)
（一） 原代培養(yǎng)
1、在手術室無菌條件下，切取新鮮的皮膚，增殖性瘢痕和瘢痕疙瘩組織，修除表皮和皮下組織，鹽水反復沖洗后放入含PS的DMEM培養(yǎng)液內帶回無菌工作間。
2、把組織塊置于培養(yǎng)皿內，Hank,s液漂洗三遍后吸凈Hank,s液，眼科剪反復剪切組織塊成0.5－1mm3大小。用彎頭吸管吸取組織塊接種于40ml培養(yǎng)方瓶瓶壁上，組織塊間留約0.3－0.5cm的間距。
3、 塞好瓶塞，放入37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱內3.5小時使培養(yǎng)的組織小塊微干涸。
4、從溫箱中取出培養(yǎng)瓶，向瓶底輕輕注入含20%CS及PS的DMEM培養(yǎng)液5ml，然后緩緩翻轉培養(yǎng)瓶，讓培養(yǎng)液慢慢覆蓋附于瓶壁上的組織小塊，置于37℃溫箱內培養(yǎng)。
5、一周后取出培養(yǎng)瓶，棄去瓶內培養(yǎng)液，Hank,s液漂洗兩次后加相同的培養(yǎng)液5ml繼續(xù)培養(yǎng)。以后待細胞萌出后，同樣方法每周換液兩次。
（二）傳代培養(yǎng)
待原代培養(yǎng)細胞生長基本融合成片時即可傳代。
1、吸出培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)液，Hank,s液漂洗兩次，向瓶內加入0.5%的*溶液少許以覆蓋瓶底為度。
2、大約1分鐘左右，鏡下觀察細胞胞質回縮，細胞間隙增大時立即吸出*液，加入DMEM培養(yǎng)液終止消化。
3、用吸管吸取培養(yǎng)液輕輕反復吹打瓶壁細胞使之脫落形成細胞懸液，按1：3比例分裝傳代，加入足量的DMEM培養(yǎng)液后置于37℃恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。
4、每周換液兩次，待細胞融合成單層再次傳代。本實驗均在第4－8代進行。
