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細胞轉(zhuǎn)染方法與原則

閱讀:329發(fā)布時間:2015-9-21

細胞轉(zhuǎn)染在研究基因功能、調(diào)控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)等方面的應(yīng)用越來越廣泛。細胞轉(zhuǎn)染常用的主要有三種方法:脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、電穿孔轉(zhuǎn)染以及病毒轉(zhuǎn)染。

elisa試劑盒 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是目前zui方便的方法之一,但轉(zhuǎn)染效率低,有細胞毒性,對細胞的選擇性也比較強??s短消化后貼壁時間或是反式轉(zhuǎn)染(先在培養(yǎng)皿加入混合好的轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒,然后接種細胞)能夠在一定程度上提高轉(zhuǎn)染效率,但相對來說轉(zhuǎn)染效率還是比較低,尤其是對于HeLa、MDCK等細胞膜比較厚的“皮實"細胞,轉(zhuǎn)染效率就更低。

elisa試劑盒 電穿孔轉(zhuǎn)染就是電流可逆地擊穿細胞膜形成瞬時小孔促使DNA分子進入胞內(nèi)。當遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或幾乎無法轉(zhuǎn)入時建議用電穿孔法轉(zhuǎn)染。但一般對細胞損傷比較大。

對于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染與電穿孔轉(zhuǎn)染都無法成功轉(zhuǎn)染的細胞系建議用病毒感染,但是轉(zhuǎn)染的基因片段不能太大,同時有一定的安全風險,制備包裝病毒價格比較昂貴,比較適用于實驗室一次需要量很大的常用質(zhì)粒包裝。

基于電穿孔轉(zhuǎn)染的缺點,美國primax專門研究了iporation-Primax細胞轉(zhuǎn)染儀,他電轉(zhuǎn)的電流非常小,同時電流能根據(jù)細胞單層的直徑大小進行自適性調(diào)節(jié),實現(xiàn)細胞幾乎在生理狀態(tài)下的電轉(zhuǎn)染,細胞死亡率比較低。同時一般的電轉(zhuǎn)染儀器適用于懸浮細胞或是需要將細胞消化后轉(zhuǎn)染,但這對細胞損傷比較大(尤其是原代細胞、干細胞等),同時對于某些必須貼壁生長的細胞*不適用,elisa試劑盒 iporation-Primax細胞轉(zhuǎn)染儀是在細胞貼壁的生理狀態(tài)下的轉(zhuǎn)染。

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