美國NovaBios黃熱病毒ELISA檢測試劑盒（酶免法）

廣州健侖生物科技有限公司

本公司專業(yè)供應(yīng)各種進(jìn)口品牌黃熱病檢測試劑盒，包括美國的NovaBios、廣州創(chuàng)侖等CDC品牌。主要包括膠體金、酶免、PCR等方法學(xué)。歡迎咨詢

黃熱病毒IgM、IgG、ELISA檢測試劑、黃熱病快速檢測試劑盒、

黃熱病毒核酸檢測試劑盒（熒光探針PCR）

美國CDC的黃熱病毒診斷試劑——美國的NovaBios

美國NovaBios黃熱病毒ELISA檢測試劑盒（酶免法）

【黃熱病簡介】
黃熱病，歷*稱為黃色杰克，黃色瘟疫或青銅約翰，是一種急性病毒性疾病。在大多數(shù)情況下，癥狀包括發(fā)熱，寒戰(zhàn)，食欲不振，特別是在背部的肌肉痛，和頭痛。癥狀通常在五天內(nèi)改善。在一些人在一天內(nèi)改善，發(fā)燒回來，腹痛發(fā)生，肝損傷開始導(dǎo)致黃色皮膚。如果發(fā)生這種情況，出血和腎臟問題的風(fēng)險(xiǎn)也增加。

【檢測原理】
96孔板YFV-IgM/IgG特異性抗原。將對(duì)照或測試樣品加入到合適的孔中并孵育。用洗滌緩沖液洗去游離組分。將HRP綴合的檢測試劑加入到孔中。TMB底物用于顯現(xiàn)HRP酶反應(yīng)。TMB由HRP催化以產(chǎn)生在加入酸性停止溶液后變?yōu)辄S色的藍(lán)色產(chǎn)物。黃色的密度與板中捕獲的樣品的YFV-IgM/IgG量成比例。外徑在微板讀數(shù)器中在450nm下通過分光亮度計(jì)測量吸亮度，然后可以計(jì)算YFV-IgM/IgG的濃度。

產(chǎn)品規(guī)格：96T/盒
檢測范圍：定性
靈敏度：定性
儲(chǔ)存和使用期：2-8℃ 儲(chǔ)存12個(gè)月
產(chǎn)品應(yīng)用：用于定性檢測人血清，血漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液或任何生物液體中的YFV-IgM。

【套件組件】
1.一個(gè)96孔板預(yù)涂
2.陽性對(duì)照：0.5ml
3.陰性對(duì)照：0.5ml
4.洗滌緩沖液（30×）：20 ml。稀釋：1:30
5.樣品稀釋緩沖液：6ml
6.6HRP酶聯(lián)試劑（RTU）：6ml
7.終止液：6ml
8.TMB底物：6ml
9.TMB底物B：6ml
10.板密封：2
11.密封袋：1

【需要材料但不提供】
1.37℃培養(yǎng)箱
2.酶標(biāo)儀（波長：450nm）
3.精確的移液器和一次性移液器吸頭
4.自動(dòng)洗板機(jī)
5.ELISA振蕩器
1.5ml管
7.板蓋
8.吸收濾紙
9.100ml和1L體積量筒。

【操作程序】
A.制備樣品和試劑
1. 樣品
收集并立即分析測試樣品（2小時(shí)內(nèi)）后立即分離?；虻确植㈤L期儲(chǔ)存在-20°C。避免多個(gè)凍融循環(huán)。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：以約2000-3000×rpm離心20分鐘，以去除沉淀，立即分析或分裝，并儲(chǔ)存于-20℃。
血清：在室溫下凝結(jié)血清（約4小時(shí)）。以約2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析血清或等分，并儲(chǔ)存在-20°C。
血漿：用檸檬酸鹽或EDTA作為抗凝劑收集血漿。在收集30分鐘內(nèi)以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲(chǔ)在-20°C冷凍。
尿：在無菌容器中收集，以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲(chǔ)在-20°C冷凍。
組織：組織勻漿的制備將根據(jù)組織類型而變化。收集和沖洗樣品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。稱重樣品并用PBS（Ph 7.4）勻化，并對(duì)細(xì)胞懸浮液進(jìn)行超聲處理。以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即測定或等分并儲(chǔ)存在-80℃。
（注意：1.*凝結(jié)血液樣品，離心，避免溶血和沈淀。   2.NaN3不能用作試驗(yàn)樣品防腐劑，因?yàn)樗种艸RP。）

2.洗滌緩沖液
用蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液30倍（1/30）（即將20ml濃縮洗滌緩沖液加入580ml蒸餾水中）。

B.測定程序
在使用前將試劑盒組分和樣品平衡至室溫。建議繪制每個(gè)測試的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
1.在預(yù)涂板上分別設(shè)置陽性/陰性，測試樣品和對(duì)照（零）孔，并記錄它們的位置。
2.將50μl的陰性和陽性對(duì)照等分到設(shè)定的孔中。
3.向?qū)φ眨悖┛字屑尤?0μl樣品稀釋緩沖液。
4.向測試樣品孔中加入50μl適當(dāng)稀釋的樣品（樣品稀釋比例：1：5）。在底部加入溶液而不接觸側(cè)壁。搖動(dòng)平板以混合內(nèi)容物。
5.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
6.取下蓋子并通過在吸收性濾紙或其他吸收材料上敲擊板來丟棄板內(nèi)容物。
7.棄去溶液，用洗滌緩沖液洗滌板5次。不要讓孔在任何時(shí)候*干燥。
手動(dòng)清洗：丟棄溶液，不要接觸側(cè)壁。將吸水濾紙或其他吸收材料上拍出液體。將洗滌緩沖液填滿每個(gè)孔，并在ELISA振蕩器上輕輕渦流2 分鐘。丟棄內(nèi)容物，并將吸收性濾紙或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自動(dòng)洗滌：棄去所有孔中的溶液，并用洗滌緩沖液洗滌板5次（用緩沖液過量填滿孔）。在zui后的洗滌之后，翻轉(zhuǎn)該板并敲擊吸收性濾紙或其它吸收材料。建議將清洗器設(shè)置為1分鐘的浸泡時(shí)間。
8.向每個(gè)孔中加入50μlHRP結(jié)合物的試劑（對(duì)照孔除外）。在每個(gè)孔底部加入溶液，不要接觸側(cè)壁。
9.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
10.取下蓋子，用洗滌緩沖液洗板5次。
11.向每個(gè)孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，蓋上平板并在37℃下孵育15分鐘。避免暴露于光。
12.向每個(gè)孔中加入50μl終止液，充分混勻。顏色應(yīng)立即變?yōu)辄S色。
13.閱讀O.D.在微板讀數(shù)器中在450nm的吸亮度在加入終止溶液的15分鐘內(nèi)。對(duì)于計(jì)算，（相對(duì)O.D.450）=（每個(gè)孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。標(biāo)準(zhǔn)曲線可以作為每種標(biāo)準(zhǔn)溶液（Y）的相對(duì)O.D.450與標(biāo)準(zhǔn)溶液（X）的相應(yīng)濃度作圖?？梢詮臉?biāo)準(zhǔn)曲線插入樣品的人類YFV-IgM濃度。
14.注意：如果稀釋樣品，稀釋倍數(shù)乘以內(nèi)插法得到稀釋前的濃度。

C.結(jié)果確定
1.試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照的平均值≥1.00; 陰性對(duì)照的平均值≤0.10。
2.臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=負(fù)控制的平均值+0.15
3.陰性結(jié)果：如果OD值<CUT OFF，樣品為人YFV-IgM陰性。
4.陽性結(jié)果：如果OD值≥CUTOFF，樣品為人類YFV-IgM陽性。

D.注意事項(xiàng)
1.在實(shí)驗(yàn)之前，離心每個(gè)試劑盒組分?jǐn)?shù)分鐘，將所有試劑倒入試管底部。
2.在混合或重新組裝部件時(shí)避免起泡或氣泡。
3.洗滌緩沖液可結(jié)晶并分離。如果發(fā)生這種情況，請(qǐng)加熱管以溶解。
4.建議每個(gè)對(duì)照和樣品一式兩份或重復(fù)測量三次。
5.不要讓板在任何時(shí)候*干燥！這可以使板上的生物材料失活。
6.不要重復(fù)使用移液器吸頭和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中過期的組件或組件。
8.將TMB底物B儲(chǔ)存在黑暗中，并且為了避免板溫育對(duì)于溫度差的邊緣效應(yīng)，建議在使用前在室溫下使TMB底物平衡30分鐘。用滅菌的吸頭抽吸所需的劑量，不要將殘留溶液倒回到小瓶中。

美國NovaBios

發(fā)病機(jī)理
病毒侵入人體后擴(kuò)散到局部淋巴結(jié)，并在其中復(fù)制繁殖，數(shù)日后進(jìn)入血循環(huán)形成病毒血癥，主要累及肝、脾、腎、淋巴結(jié)、骨髓、橫紋肌等。以后病毒從血中消黃熱病，而在脾、骨髓、淋巴結(jié)等處仍可檢出。病毒的強(qiáng)毒株常主要侵犯肝臟，并引起嚴(yán)重病變。
病理改變
黃熱病的病理變化乃病毒聚集于各器官組織，并在其中復(fù)制增殖所引起。肝病變主要見于小葉中間帶，肝細(xì)胞呈濁腫、點(diǎn)狀凝固性壞死及嗜酸性透明變性，形成具相當(dāng)特征性的康氏小體（Councilman bodies）；嚴(yán)重肝病變可導(dǎo)致深度黃疸、各處出血、低血糖等。黃熱病變輕重不一；見于近曲小管，小管上皮濁腫、脫落或壞死，管腔充塞顆粒樣碎屑；腎功能減退和尿毒癥乃血容量減少、腎小管壞死等所引起。心肌有廣泛退行性變和脂肪浸潤，偶有灶性出血，病變常累及竇房結(jié)和希氏束；臨床上可出現(xiàn)心率減慢、心律黃熱病常、低血壓、心力衰竭等。腦部偶見水腫及灶性出血，系繼發(fā)于腦組織缺氧和乳酸血癥等代謝改變，而非病毒直接侵犯所致。各臟器組織元炎癥細(xì)胞浸潤，此乃本病的特征之一。出血傾向與血小板減少、血小板功能異常和凝血因子減少有關(guān)。
流行病學(xué)/黃熱病 黃熱病
黃熱病
傳播黃熱病的伊蚊圖冊(cè)
黃熱病是一種蚊媒性自然疫源性疾病，流行模式可分為城市型和叢林型。叢林型是原發(fā)性自然疫源地，而城市型則由于人類活動(dòng)從前者擴(kuò)散而致。
蚊子感染蚊叮咬人后，將含黃熱病病毒的唾液注入人體皮下毛細(xì)血管， 迅速擴(kuò)散到局部淋巴結(jié)，不斷繁殖，數(shù)日后進(jìn)入血流，形成病毒血癥。然后病毒定位于肝、腎、脾、心、骨髓和淋巴結(jié)等組織器官，即使血中病毒已經(jīng)消黃熱病，而組織器官中病毒可依然存在。由于病毒的直接損害作用，引起廣泛組織病變，其中肝臟病理變化診斷的特異性。黃熱病
傳染源
城市型的主要傳染源為病人及隱黃熱病染者，特別是發(fā)病4日以內(nèi)的患者。叢林型的主要傳染源為猴及其他靈長類，在受染動(dòng)物血中可分離到病毒。在非洲及美洲熱帶森林中生長繁殖的靈長目動(dòng)物是叢林型黃熱病的主要傳染源。而城市型黃熱病以病人為傳染源。
傳播途徑
傳播群英會(huì)為蚊蟲，城市型以埃及伊蚊為*傳播媒介，以人-埃及伊蚊人的方式流行。叢林型的媒介蚊種比較復(fù)雜，在非洲伊蚊、辛普森伊蚊、趨血蚊屬（Hemagogus）、煞蚊屬（Sabethes）等，以猴-非洲伊蚊或趨血蚊屬等-猴的方式循環(huán)。人因進(jìn)入?yún)擦种泄ぷ鞫苋?。蚊吮吸病人或病猴血后?jīng)9～12天即具傳染性，并可終生攜帶病毒。
易感者
在城市型中無論男女老少均屬易感，但成年人大多已獲得免疫，故患者以兒童為多。在叢林型中則患者多數(shù)為成年男人。感染后可獲得持久免疫力，未發(fā)現(xiàn)有再感染者。
黃熱病的輕型和隱黃熱病染病例遠(yuǎn)較重病患者為多，可由前兩者體內(nèi)存在特異中和抗體而證實(shí)，這些病例對(duì)本病的傳播起著極為重要的作用，當(dāng)無免疫的人群大批進(jìn)入會(huì)造成本病的暴發(fā)。
臨床表現(xiàn)/黃熱病 黃熱病
黃熱病毒感染后，5%～20%出現(xiàn)臨床疾病，其余為隱黃熱病染。潛伏期為3～7日，輕癥可僅表現(xiàn)為發(fā)熱、頭痛、輕度蛋白尿等，而不伴有黃疸和出血，持續(xù)數(shù)日后即恢復(fù)。重癥一般可分為感染期、中毒期和恢復(fù)期3期。

美國NovaBios

我司還提供其它進(jìn)口或國產(chǎn)試劑盒：登革熱、瘧疾、乙腦、寨卡、黃熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團(tuán)菌等試劑盒以及日本生研細(xì)菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產(chǎn)品。

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Pathogenesis
After the virus invades the human body after the spread to the local lymph nodes, and in which reproduction and reproduction, a few days later into the blood circulation to form viremia, mainly involving the liver, spleen, kidney, lymph nodes, bone marrow, striated muscle and so on. After the virus from the blood yellow fever, and in the spleen, bone marrow, lymph nodes, etc. can still be detected. Virus virulent strains often violate the liver and cause serious lesions.
Pathological changes
The pathological changes of yellow fever are caused by the accumulation of viruses in various organs and tissues. Liver lesions are mainly seen in the middle lobes, the liver cells are turbid, dot-like coagulation necrosis and eosinophilic transparent degeneration, the formation of a very characteristic of the body of the body (Councilman bodies); severe liver disease can lead to deep jaundice, everywhere Bleeding, hypoglycemia and so on. Yellow fever lesions vary; seen in the proximal tubule, tubule epithelial swelling, shedding or necrosis, lumen filled with granular debris; renal dysfunction and uremia is reduced blood volume, renal tubular necrosis caused by. Myocardium has a wide range of degenerative changes and fat infiltration, occasional focal bleeding, lesions often involving the sinus node and Xi Bun; clinical heart rate can be slowed down, heart rhythm, often, low blood pressure, heart failure and so on. Brain edema and focal bleeding, the Department of secondary to brain tissue hypoxia and lactic acid and other metabolic changes, rather than a direct violation of the virus. Each organ tissue element inflammatory cell infiltration, which is one of the characteristics of the disease. Hemorrhagic tendency is associated with thrombocytopenia, abnormal plaet function, and reduced coagulation factors.
Epidemiology / yellow fever yellow fever
Yellow fever
A mosquitoes for the spread of yellow fever
Yellow fever is a mosquito-borne natural foci disease, the epidemic model can be divided into urban and jungle type. Jungle type is the original natural foci, and urban type because of human activities spread from the former Erzhi.
Mosquitoes infected mosquito bites, the yellow fever virus saliva into the human subcutaneous capillaries, rapid spread to the local lymph nodes, continue to multiply, a few days into the bloodstream, the formation of viremia. Then the virus is located in the liver, kidney, spleen, heart, bone marrow and lymph nodes and other tissues and organs, even if the blood virus has been yellow fever, and tissues and organs of the virus can still exist. Due to the direct damage of the virus, causing extensive tissue lesions, in which the liver pathology changes the most diagnostic specificity. Yellow fever
Source of infection
The main source of urban infection for patients and patients with hidden yellow fever, especially within 4 days of onset of patients. The main source of jungle is monkey and other primates, and the virus can be isolated in the blood of infected animals. The primates that grow and multiply in tropical forests of Africa and the Americas are the main source of jungle yellow fever. While the urban type of yellow fever to the patient as a source of infection.
way for spreading
The spread of the colossus for the mosquitoes, urban type Aedes aegypti as the only media, people - the Egyptian Aedes popular way. Jungle-type media mosquitoes are more complex, in Aedes aegypti, Simpson Aedes mosquito, Hemagogus (Hemagogus), mosquitoes (Sabethes), monkeys - Aedes aegypti or mosquitoes - monkeys cycle. People are infected by entering the jungle. Mosquito sucking the patient or disease monkey blood after 9 to 12 days that is contagious, and can carry the virus for life.
Susceptible person
In urban areas, both men, women and children are susceptible, but adults have been immune, so patients with children as much. In the jungle type, the majority of patients are adult males. Infection can be sustained after the immune system, no re-infection were found.
Yellow fever and dark yellow fever cases are far more serious cases, can be the first two bodies in the presence of specific neutral antibodies and confirmed that these cases of the spread of the disease plays a very important role, when the immune A large number of people will cause the outbreak of the disease.
Clinical manifestations / yellow fever Yellow fever
Yellow fever virus infection, 5% to 20% of clinical disease, the rest of the hidden yellow fever. Incubation period of 3 to 7 days, mild can only show fever, headache, mild proteinuria, etc., without jaundice and bleeding, after a few days to recover. Severe general can be divided into infection, poisoning and recovery period 3.